在微生物实验室中,除了杂菌污染,还有一个令人头疼的问题--噬菌体污染。噬菌体是什么呢?今天初步认识噬菌体。
噬菌体
噬菌体,(phage,bacteriophage),是一种原核生物的病毒,包括噬细菌体(bacteriophage)、噬放线菌体(actinophage)和噬蓝细菌体(cyanophage)。噬菌体在自然界中广泛存在,原核生物存在的地方也基本上存在噬菌体。
噬菌体繁殖
噬菌体不同于其它细胞类型的微生物,它属于病毒,没有个体的生长过程,只有主要成分的合成和装配的过程,因此同种的噬菌体之间没有年龄和大小的差别。
噬菌体的繁殖一般经过5个阶段:吸附、侵入、增殖、装配和裂解:
吸附(adsorption,attachment):这是噬菌体繁殖的第一个阶段。此阶段是噬菌体与特异宿主在水环境中发生碰撞后,噬菌体的尾丝尖端与特异宿主细胞表面的特异受体发生接触后,噬菌体将吸附在受体上,然后将刺突、基板固着于细胞表面。
侵入(penetration,injection):这是噬菌体繁殖的第二个阶段。此阶段噬菌体吸附在特异宿主细胞表面后,噬菌体的尾丝发生收缩,其基板获得构象刺激,引起尾鞘中的144个蛋白质亚基发生移位过程,同时紧缩为原长的一半,由此将尾管推出并插入细胞壁和膜中。
增殖(replication):这是噬菌体繁殖的第三个阶段,包括核酸的复制和蛋白质的生物合成。噬菌体以其核酸信息向宿主细胞发出指令,借助宿主细胞的营养物质,完成核酸的复制和蛋白质合成的过程,获得“装配”阶段所需的“部件”。
装配(成熟,assembly):这是噬菌体繁殖的第四个阶段,实际上是把已经合成的各种”部件“进行装配的过程,包括:DNA分子的缩合,通过衣壳包裹DNA而形成完整的头部,尾丝和尾部的其它”部件“则独立装配完成,然后头部和尾部相结合后,再装上尾丝。
裂解(释放):这是噬菌体繁殖的第五个阶段。当宿主细胞内大量子代噬菌体成熟后,由于水解细胞膜的脂肪酶和水解细胞壁的溶菌酶等作用,促进了细胞的裂解,从而完成了子代噬菌体的释放。
能够在短时间内完成吸附、侵入、增殖、成熟和裂解5个阶段的噬菌体是烈性噬菌体。为定量描述烈性噬菌体的生长规律,可以用一步生长曲线来表示。
一步生长曲线又称为一级生长曲线(one-step growth curve),可以分为3个阶段:潜伏期(latent phase)、裂解期(rise phase)和平稳期(plateau):
潜伏期:此阶段是当噬菌体的核酸侵入宿主细胞后至第一个成熟子代噬菌体释放前的一段时间。此阶段又可以分为2个时期:第一个时期是隐晦期(eclipse phase),此时期宿主细胞内主要进行核酸的复制和蛋白质合成,如果人为裂解细胞,获得的裂解液没有侵染性;第二个时期是胞内累积期(intracellul araccumulate phase),这个时期的宿主细胞内已经在进行子代噬菌体的装配,如果人为裂解细胞,获得的裂解液是具有侵染性的。
裂解期:此阶段是紧接在潜伏期后,子代噬菌体已经成熟和急剧增多,能够将宿主细胞迅速裂解的一段时间。此阶段在理论上是一瞬间出现的,但因为在宿主细胞群体中每个宿主细胞的裂解过程存在不同,所以裂解期会比较长。
平稳期:此阶段是宿主细胞已经被完成裂解的时期,其主要特点是溶液中噬菌体的效价达到最高值。
一步生长曲线的基本实验步骤如下:
噬菌体的稀释液去感染高浓度的宿主细胞,以保证每个细胞所吸附的噬菌体至多只有1个;
经过数分钟的吸附后,在混合液中加入适量的相应抗血清,以中和未吸附的噬菌体;
用保温的培养液稀释上述混合液,并终止抗血清的作用,然后放置适宜条件下培养;
在培养期间设置取样时间,在取样时间取样并测定其效价,根据结果绘制成一步生长曲线。
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