2结果与分析
2.1鼠李糖乳杆菌Probio-M9连续培养100代过程中表型研究
2.1.1绘制生长曲线
不同的生长周期，菌种的生理状态有所差异，因此，菌种的传代通常选择对数生长期末期或者稳定期初期为宜，以1%的接种量，将原始菌株接种于液体MRS培养基中，37℃恒温培养24 h过程中OD600nm值变化情况如图1所示。
图1鼠李糖乳杆菌Probio-M9原始菌株生长曲线
由图1可知鼠李糖乳杆菌Probio-M9在37℃恒温培养24 h过程中OD600nm值的变化趋势，0～2 h鼠李糖乳杆菌Probio-M9处于延滞期，2～20 h处于对数生长期，20 h后进入稳定期，这与Liu等对鼠李糖乳杆菌Probio-M9生长特性研究结果基本一致。活菌数变化趋势与OD600nm值总体相似，初始接入活菌数为（1.37±1.40）×106CFU/mL，对数生长期（2～20 h）活菌数增加至（1.64±0.71）×108CFU/mL，且此后随着时间推移活菌数不再增加。如图1所示，20～24 h时虽OD600nm值略有增加，但活菌数基本维持不变，表明在20～24 h期间鼠李糖乳杆菌Probio-M9生长已处于稳定期。参照1.2.1.3节菌株生长代时计算方法，到达稳定期鼠李糖乳杆菌Probio-M9的生长代数约为6.90代，且一直培养到24 h仍处于稳定期，同时考虑到便于连续传代操作，故选择每个培养周期为（24±0.50）h作为传代周期。
2.1.2菌株连续传代过程中的菌体形态观察
对鼠李糖乳杆菌Probio-M9 A0、A25、A50、A75和A100菌悬液进行革兰氏染色并在显微镜下观察菌体形态，发现鼠李糖乳杆菌Probio-M9连续传100代菌体形态均属于鼠李糖乳酪杆菌典型形态，且在连续传代过程中，各代时的菌体形态无明显差异。
2.1.3菌株连续传代过程中碳水化合物利用能力
本试验对连续传代培养的鼠李糖乳杆菌Probio-M9的碳水化合物代谢能力进行了分析。原始菌株及连续培养传代过程中（0，25，50，75，100代）的菌株对49种不同碳水化合物的代谢能力进行检测，结果见表2。
表2不同代时鼠李糖乳杆菌Probio-M9碳水化合物（API 50CH）利用情况
由表2可知，鼠李糖乳杆菌Probio-M9可利用28种碳水化合物：丙三醇、D-核糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、L-山梨糖、L-鼠李糖、肌醇、甘露醇、山梨醇、甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷、N-乙酰葡萄糖胺、苦杏仁苷、熊果苷、七叶灵-柠檬酸铁、水杨苷、D-纤维二糖、D-麦芽糖、D-乳糖、D-蔗糖、D-海藻糖、D-松三糖、D-龙胆二糖、D-土伦糖、D-来苏糖、D-塔格糖和葡萄糖酸钾。鼠李糖乳杆菌Probio-M9在连续培养100代过程中，5个不同代时（A0/A25/A50/A75/A100代）的碳水化合物利用能力无变化，说明鼠李糖乳杆菌Probio-M9连续培养100代对其碳水化合物的代谢能力没有影响，菌株在此连续培养传代过程中稳定。
2.1.4菌株传代过程靶向代谢物分析
本研究对鼠李糖乳杆菌Probio-M9在连续传代过程中，各代时（0/25/50/75/100代）菌株有机酸及短链脂肪酸代谢物进行分析，结果表明如图3所示，各代时（0/25/50/75/100代）在苯乳酸（Phenyllactic acid）、柠檬酸（Citric acid）、酒石酸（Tartaric acid）苹果酸（malic Acid）、琥珀酸（Succinic acid）、4-羟基苯乳酸（4-Hydroxyphenyllactic acid）、苯甲酸（Benzoic acid）、草酸（Oxalate）、水杨酸（Salicylic acid）、苯丙酸（Propionic acid）、乳酸（Lactic acid）、丙酸（Propionic acid）、丁酸（Butyrate）、己酸（Hexanoic acid）、乙酸（Acetic acid）等代谢物质之间无明显差异。
图3不同代时鼠李糖乳杆菌Probio-M9靶向代谢特征比较