探讨欧洲花楸悬浮细胞生长规律和动力学参数。方法:测定欧洲花楸悬浮细胞生物量及细胞悬浮液pH值变化;利用细胞鲜重和干重值对欧洲花楸悬浮细胞生长曲线进行拟合,用数学建模模拟欧洲花楸悬浮细胞增殖情况,并对拟合函数求一阶、二阶导数,求算欧洲花楸悬浮细胞生长速率及生长加速度。


细胞生长曲线建模方法


根据欧洲花楸悬浮细胞生长曲线,构建Logistic、Gompertz和Gauss模型,利用R2值确定最佳拟合模型,并利用matlab2010b软件,由筛选得到生长曲线函数中求得细胞最大增长速度及加速度参数,


细胞中次生代谢产物提取和检测方法


将收获的细胞用15 mL甲醇在研钵中研碎,过滤到鸡心瓶中,过滤后的细胞残渣再用10 mL甲醇提取一次,合并滤液,置于旋转蒸发仪上浓缩至干。培养基用15 mL乙酸乙酯萃取两次,用分液漏斗将乙酸乙酯层转移至鸡心瓶中,于旋转蒸发仪上浓缩至干,后用500μL的甲醇溶解,0.45μm滤膜过滤,用于HPLC检测。


HPLC测定条件为:4.6×150 mmC18(5μm)reverse column;流动相为水(0.1%甲酸):甲醇(50∶50)流速0.7 mL·min-1;全波长紫外检测。

欧洲花楸悬浮细胞干重增长曲线

结果:欧洲花楸悬浮细胞液的pH值随培养时间增加而越来越大,培养时间到16 d,pH>6,不再适宜细胞生长;Logistic模型能够描述欧洲花楸悬浮细胞生长曲线变化。培养第5d时细胞增长加速度达到最大,在8 d时生长速率达到最大,结论:欧洲花楸悬浮细胞生长函数符合logistic曲线,函数为f(x)=0.369 9/(1+10.77e-0.329 2x),细胞在14 d时进入增长平台期,在细胞生长至第5 d时可进行诱导子处理。


相关新闻推荐

1、基于全自动生长曲线分析仪研究梅洛葡萄酒发酵性能和香气产生的影响因素

2、微生物发酵培养基配制注意事项

3、枯草芽孢杆菌的昼夜波动生长与根际溶解氧和pH值密切相关

4、物理化学因素对细菌生长的影响【实验】

5、影响微生物生长的无机元素及其作用