发热伴血小板综合征病毒(Severe fever with thrombocytopeniasyndrome,SFTSV),主要以发热,胃肠道症状、血小板减少为主要临床表现的感染性病例,少数患者因多器官衰竭死亡的情况。SFTSV的主要宿主是蜱虫,该病毒在中国中东部湖北、河南、浙江、山东等地以及日本和韩国流行。主要感染中老年人,感染后会出现高热、厌食、肌肉痛、寒战、淋巴结肿大、血小板减少等症状。
目前缺乏针对SFTSV的特异性治疗药物,只能进行广谱抗病毒治疗和对症下药,这为SFTS的预防和控制带来极大的困难。由于平常的药物筛选是通过SFTSV的活病毒进行药物筛选,耗时长,成本大。
鉴于此,技术人员提供了一种解决方案——一种表达荧光素酶基因的发热伴血小板综合征病毒。
SFTSV-Nluc的重组病毒的鉴定
测定SFTSV-Nluc,将SFTSV-Nluc与野生型的SFTSV-WT共同加入到Vero细胞中培养相同的时间。取12,24,36,48,72,96小时6个时间点的样品测定病毒的扩增滴度。如图2所示,实验发现SFTSV-Nluc与SFTSV-WT的扩增水平一致,说明Nluc基因的加入并没有影响SFTSV的生长曲线。
为了测定SFTSV-Nluc表达Nluc基因的能力,将重组病毒SFTSV-Nluc和SFTSV-WT按照MOI=0.01的感染方式感染Vero细胞,在感染12,24,36,48,72和96小时后收取细胞使用Nano-Glo luciferase Assay System(Promega)试剂盒检测病毒表达Nluc的能力。荧光强度Luciferase activity可以说明Nluc表达的能力。如图3说明SFTSV-Nluc的Nluc是正常表达的,并且随着感染时间的增加Nluc的表达量也随之增加,证明实验得到的SFTSV-Nluc可以在细胞水平快速检测。并且可以根据稳定表达的Nluc基因来示踪病毒的感染情况。
图SFTSV-Nluc和SFTSV-WT的病毒生长曲线
该荧光素酶重组病毒株可以用于小鼠酶活成像系统建立快速高通量的抗病毒药物筛选技术或平台,为活体动物成像、药物筛选、药物作用机制及疫苗评价等提供广泛的应用价值。
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