制作活动全口义齿和局部义齿最常用的材料是聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)。由于其良好的美观效果、可承受的生产成本和制造简单性，这种材料得到了广泛的应用。当患者忽视保持假牙清洁时，该区域通常会检测到包括白色念珠菌和变形链球菌在内的微生物。假牙口炎（DS）是一种真菌感染，在假牙使用者中发病率很高，是最常见的真菌感染之一。尽管DS可能涉及全身因素，但义齿表面上形成的微生物菌斑的鉴定是导致DS发生的关键因素。Citation6白色念珠菌与DS的发生以及其他因素（包括创伤、全身性疾病、假牙卫生不良）有关。某些报告称，变形链球菌会促进白色念珠菌在假体上生长，从而导致DS。因此预防DS的关键措施包括限制义齿菌斑内微生物的增殖,必须仔细清洁假牙，以降低交叉污染的风险并促进最佳的口腔健康。对于机械清洁方式有困难的患者，建议使用化学义齿清洁剂来清洁义齿。人们普遍认为变形链球菌是导致龋齿的一个重要因素，进入循环系统后可能会导致亚急性细菌性心内膜炎等全身性疾病，但AgBr-NP CTMAB的抗菌活性对变形链球菌生长的具体影响仍然存在,变异病毒仍然未知。需要进一步研究来阐明AgBr-NP CTMAB在促进口腔健康方面的功能。本研究的目的是确定AgBr-NP CTMAB在抑制变形链球菌生长和防止生物膜形成方面的功效，其次评估AgBr-NP CTMAB对表面硬度的影响PMMA与蒸馏水和Polident相比的、弯曲强度和粗糙度。
Bioscreen全自动生长曲线分析仪的应用
将200µL 1×106 CFU/mL的细菌加入到自动生长曲线分析仪的平板中，设3个平行孔。使用Bioscreen全自动生长曲线分析仪监测变形链球菌在37°C和持续中速摇动下24小时培养期内的动态发育。每隔1小时测定OD600nm值，以变形链球菌的OD值为纵坐标，以培养时间为横坐标，绘制生长曲线。这种系统方法确保了在特定实验条件下精确跟踪和记录变形链球菌的生长动态。根据CLSI（临床和实验室标准研究所）标准化标准，将测试浓度的AgBr-NP CTMAB溶液施用到含有106 CFU/mL变形链球菌的平板上。这些浓度为10μg/mL、5μg/mL、2.5μg/mL、1.25μg/mL和0.625μg/mL。将溶液在37°C有氧条件下孵育24小时。每组一式三份。实验重复三次。使用Bioscreen自动生长曲线分析仪捕获变形链球菌的动态生长以及生长曲线。
实验结果
AgBr-NP CTMAB溶液对浮游变形链球菌表现出强大的抗菌作用，最低杀菌浓度为5µg/mL。10µg/mL AgBr-NP CTMAB溶液可有效抑制变形链球菌生物膜的形成。(2)AgBr-NP CTMAB(10µg/mL和20µg/mL)浸泡后表面粗糙度与蒸馏水相比无显著性差异(P>0.05)，Polident显着高于蒸馏水(P<0.05)。与蒸馏水中相比，浸泡在Polident中的PMMA样品的表面硬度显着降低（P<0.05）。而浸泡在AgBr-NP CTMAB中后表面硬度没有显着差异（P>0.05）。弯曲强度结果表明AgBr-NP CTMAB与Polident和水之间没有统计学差异。AgBrNP CTMAB可以有效抑制浮游生物形链球菌的生长和生物膜的形成，而不影响PMMA的弯曲强度、显微硬度或表面粗糙度。因此，AgBrNP CTMAB有望成为一种新型假牙清洁剂。
图1、不同浓度AgBr-NP CTMAB对变形链球菌的生长曲线。
图2、AgBr-NP CTMAB对变形链球菌的抑制区域照片。在图中，在阴性对照PBS组周围没有观察到明显的抑制圈，表明没有显着的抑制作用。然而，在用AgBr-NP CTMAB溶液处理的滤纸周围观察到明显的抑制圈。500μg/mL AgBr-NP CTMAB滤纸可以达到与0.05%氯氰菊酯相似的抑制圈。
图3、各组溶液孵育24 h后600 nm处的OD结果。在图中OD600 nm值与NC组差异显著，而2.5μg/mL、1.25μg/mL和0.625μg/mL AgBr-NP CTMAB溶液的OD600 nm值与阴性对照组无统计学差异。
图4、孵育24 h后各组溶液的浊度。将各组溶液转移至离心管中并拍照，10μg/mL、5μg/mL AgBr-NP CTMAB溶液和CPC溶液组与NC组相比，浊度明显降低。2.5μg/mL、1.25μg/mL、0.625μg/mL AgBr-NP CTMAB溶液与阴性对照组的浊度无显著差异。
图5、不同溶液组中BHI琼脂平板培养48小时后的菌落生长情况。(A)原始溶液涂覆板的结果。(B)稀释10,0000倍后涂板的结果。与NC组相比，5μg/mL、10μg/mL AgBr-NP CTMAB和0.1%氯化十六烷基吡啶溶液组均未见菌落。相比之下，2.5μg/mL、1.25μg/mL和0.625μg/mL的AgBr-NP CTMAB溶液组显示菌落遍布整个平板，且菌落生长与NC组相似。5μg/mL、10μg/mL AgBr-NP CTMAB溶液和0.1%氯化十六烷基吡啶溶液组均未发现菌落生长。相比之下，2.5μg/mL、1.25μg/mL、0.625μg/mL的AgBr-NP CTMAB溶液组，随着浓度的降低，菌落数量由稀疏变得密集，表明AgBr-NP CTMAB溶液组的抑菌能力增强。
总结
本论文研究AgBr纳米颗粒（NP） CTMAB（十六烷基三甲基溴化铵）对变形链球菌（S.mutans）及其生物膜的抑制作用，并评估聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）表面粗糙度（Ra）、显微硬度、和长时间浸泡在AgBr-NP CTMAB中的弯曲强度，适用于义齿清洁行业。研究人员通过菌落形成试验、OD600和激光共聚焦显微镜测量AgBr-NP CTMAB对变形链球菌的抗菌活性。在浸泡溶液180或360天后测量样品表面粗糙度、显微硬度和弯曲强度(MPa)值的变化。AgBrNP CTMAB可以有效抑制浮游生物S.mutans的生长和生物膜的形成，而不影响PMMA的弯曲强度、显微硬度或表面粗糙度。因此研究人员认为AgBrNP CTMAB有望成为一种新型假牙清洁剂。