2结果与分析


2.1孢子萌发率和芽管长度分析


真菌侵染花生、玉米等主要通过如下途经孢子附着在其表面、在适当的环境下萌发、菌丝不断扩张,从而导致食物污染。抑制孢子萌发率和芽管长度是抑制真菌污染的重要指标。


姜黄素连续处理对黄曲霉的孢子萌发率和芽管长度抑制情况如图1所示。

图1姜黄素对黄曲霉孢子萌发率和芽管长度的抑制作用


由图1可知:与污染阳性对照组相比,姜黄素处理组的黄曲霉孢子萌发率和芽管长度降低;污染阳性对照组的黄曲霉孢子萌发率为92.7%,姜黄素处理组的黄曲霉孢子萌发率为81.3%,降低了11.4%;黄曲霉孢子芽管长度实验中污染阳性对照组长度为45.8μm,姜黄素处理组为32.6μm,芽管长度降低了28.8%。结果表明,姜黄素连续处理可以在一定程度上抑制黄曲霉孢子萌发率和芽管长度(P<0.05)。


2.2抑菌剂对病原菌抑制效果


为了探究姜黄素对黄曲霉是否抑制,首先在体外实验中,通过平板实验,在培养基中加入姜黄素观察其对黄曲霉菌落的生长情况。


姜黄素对黄曲霉的抑制情况如图2所示。从图2可以看出:姜黄素处理后明显地抑制了黄曲霉菌落的生长;相对于污染阳性对照组,黄曲霉正常生长直径平均为14 cm,而姜黄素处理组的黄曲霉生长直径为11 cm,抑制生长率为21.4%。可以看出,加入姜黄素对黄曲霉的生长具有抑制作用(P<0.05)。

图2姜黄素对黄曲霉生长抑制情况


2.3姜黄素对AFB1产生量的抑制作用


农产品遭受黄曲霉的污染主要是由于其能够产生致命性黄曲霉毒素B1,通过检测黄曲霉毒素B1含量,能够进一步评估姜黄素对黄曲霉的抑制作用。样品经过滤处理后,通过免疫亲和柱的富集,再经过三氟乙酸进行柱前衍生,样品置于高效液相色谱(high performance liquid chromatogrphy,HPLC)荧光检测器检测。黄曲霉毒素B1产量如图3所示。

图3姜黄素对AFB1产生量的抑制作用


由图3可知:姜黄素处理组的黄曲霉毒素B1的产生量为23.8 ng/g,污染阳性对照组的产生量为47.5 ng/g;相比之下,姜黄素处理组毒素降低了46.9%。分析结果可知,姜黄素能够显著降低黄曲霉毒素B1的产生(P<0.05)。因此,姜黄素作为天然的抑菌剂具有极大的开发潜力。


2.4洋葱穿透实验结果


黄曲霉在发生侵染时,本文首先通过芽孢萌发产生菌丝,然后通过菌丝汲取生存所需要的养分。菌丝的活力强弱会影响黄曲霉侵染的严重程度。通过对菌丝做洋葱表皮穿透实验,测试菌丝活力。


台盼蓝染色后在显微镜下观察,孢子穿透洋葱表皮如图4所示。从图4可以看出,污染阳性对照组在萌发生长后,菌丝穿透洋葱表皮进入洋葱细胞内,这会导致在洋葱细胞外部的菌丝会被台盼蓝染成蓝色,而留在内部的菌丝未被染色。姜黄素处理组的黄曲霉菌丝大都被染上了蓝色,黄曲霉的菌丝活性降低,说明姜黄素降低了黄曲霉菌丝的穿透能力。

图4姜黄素对黄曲霉菌丝穿透力的影响


2.5侵染花生实验结果


因为花生易受黄曲霉的侵染,所以在之前平板抑制实验的基础上,进一步评估姜黄素对黄曲霉的防控效果。黄曲霉侵染花生情况如图5所示。

图5姜黄素对花生黄曲霉病的抑制作用


从图5可以看出,培养7 d后,污染阳性对照组花生全部发病,而姜黄素处理组的花生仅是轻微感染,发病情况明显低于污染阳性对照组,因此姜黄素具有开发为新型抑菌剂控制食品和饲料原料中黄曲霉污染的前景。


2.6花生感官评价结果


花生感官评价结果见表2所列。由表2可知,浓度为0.3 mmol/L姜黄素的加入并不会显著影响花生的口感和气味(P>0.05),但是对于花生的色泽产生了显著性的影响(P<0.05),使用清水清洗后会显著减少姜黄素对花生色泽的影响(P<0.05)。结果表明,姜黄素的加入并不会影响花生的气味和口感,对姜黄素应用具有重要的意义。

表2花生感官评价结果


2.7抑菌剂对病原菌形态学的影响


通过实验发现,姜黄素连续处理3代对黄曲霉形态的影响如图6所示。由图6可知,在添加抑菌剂的黄曲霉中,姜黄素处理组连续处理3代孢子的颜色呈现出乳白色,而污染阳性对照组培养连续3代仍然呈现黄绿色。结果表明,姜黄素会抑制黄曲霉孢子色素的合成。

图6姜黄素连续处理3代对黄曲霉形态的影响


2.8黄曲霉对姜黄素的耐受性


为了探究黄曲霉对姜黄素的耐受性,通过对黄曲霉3代的不断培养,第3代孢子感染花生情况如图7所示。

图7姜黄素平板连续培养3代黄曲霉侵染花生发病情况


从图7可以看出,在污染阳性对照组中花生全部发病,而在姜黄素处理组中,花生仅部分感染。这说明经过姜黄素处理3代后的黄曲霉孢子侵染能力明显下降。结果表明,经过姜黄素处理后产生的黄曲霉孢子的活性同样受到一定的抑制作用,黄曲霉对姜黄素并没有产生耐受性,因此姜黄素具有作为一种长期抑菌剂的潜力。


3结论


本文主要研究了姜黄素对黄曲霉的抗真菌效果。通过姜黄素对黄曲霉抑制效果、形态学影响、菌丝的活力检验、毒素产量检测、侵染花生实验以及黄曲霉对姜黄素的耐受性实验,初步证明姜黄素对黄曲霉具有抑制作用。下一步实验将对相关抑制机理进行研究,以期对黄曲霉抑制提供新的思路。


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