三、倾注平板法
1.定义：
待分离微生物样品经过一系列梯度（一般10倍递增）稀释后，使微生物菌体充分分散，成为单细胞，然后再取出一定量稀释液和固体培养基混匀，倾注到固体培养基的方法，再经过适宜的培养条件，形成单菌落的过程。
2.目的：
获得纯培养在微生物杂菌中的数量或比例—平板计数。
3.操作步骤：
梯度稀释步骤：同平板涂布法。
倾注平板步骤：
(1)制备培养基：准备固体培养基和培养皿，高压蒸汽灭菌锅灭菌后固体培养基放置于水浴锅中备用。
(2)标记：将事先制备好的无菌平板上标记10-7、10-8、10-9，每一个梯度稀释设置三个重复。
(3)倾注：将固体培养基冷却至适合温度后，用无菌移液器吸取10-7稀释液0.1mL放入固体培养基中混匀，然后倒入编号10-7的3个培养皿中，或者用无菌移液器吸取10-7稀释液0.1mL放入编号10-7的3个平板中，倒固体培养基，在培养皿中混匀。
(4)继续倾注：同样倾注10-8稀释液和10-9稀释液。
(5)培养：将倾注好的平板平放于超净台上静置，待凝固后，将平板放置于恒温培养箱中倒置培养。
(6)计数：待长出单菌落后即可计数。
菌落计数：同平板稀释法。
4.操作技巧：
(1)固体培养基温度不宜过高，过高会烫死微生物；温度也不能太低，容易凝固结块，无法和稀释液混匀。如何确定合适的温度？
用手心手背触摸培养基，手心不烫手背烫的温度，基本就是50℃左右（不同人温度敏感性有一定差异）。
根据不同目标菌种，确定合适的温度，但一定要考虑固体培养基凝固的温度，一般40℃左右凝固。
(2)培养基和稀释液混匀过程中，沿壁摇匀，以免产生起泡，影响观察和美观。
沿壁摇匀，能够保证培养基和稀释液充分混合，也不会产生气泡，切勿猛烈摇晃，气泡太多，制成的平板无法计数。
(3)梯度稀释过程，一般用试管，试管长度要适宜，不宜过长，不方便操作，也不宜过短，无法摇匀或容易溢出。
(4)为了操作方便，可以采用离心管代替试管进行梯度稀释，上下颠倒，容易混匀。
(5)实验过程中用到的无菌水是无菌生理盐水，保护细胞。
5.注意事项：
(1)整个过程，需要在无菌环境下进行。
(2)固体培养基放置在水浴锅中，也要经常摇动，不能静置。
(3)如果发现平板上水太多，处理后再使用。
(4)切记写清楚标记。
(5)试验完毕，注意灼烧涂布器，以免影响环境，造成交叉污染。
四、平板涂布法和倾注平板法的区别和联系
1.第一步都是先梯度稀释样品，稀释好后，分离方式不同。
平板涂布法是将不同梯度的稀释液分别取少量，加入不同的固体培养基上，然后用涂布棒在平板表面涂布均匀。
倾注平板法是将不同梯度的稀释液分别取少量，和融化好的培养基混匀后倒入培养皿中。
2.固体培养基的处理方式不同
平板涂布法是将固体培养基和培养皿灭菌后，培养基冷却至合适温度再倒平板，平板凝固后才可以使用，要么无法涂布。
倾注平板法是将固体培养基灭好后，放置在恒温水浴锅中，一直等到备好不同梯度稀释液后，固体培养基冷却至适合温度跟不同梯度稀释液混匀，然后倒入干净的培养皿中。
倾注平板法为了涂布均匀平整，有时候需要事先倒一点固体培养基在培养皿中，就是双层平板。
3.平板涂布法优势和劣势
(1)涂布技术不好，经常涂布不匀，无法计数。
(2)不需要控制固体培养基温度。
(3)可以将所有单菌落挑出来，保存，用于后续试验。
4.倾注平板法优势和劣势
(1)不需要涂布，省去了涂布不匀的麻烦。
(2)需要控制固体培养基温度。
(3)无法将所有单菌落挑出来。
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