2结果
2.1噬菌体宿主范围
噬菌体MYSP03对宿主菌Flavobacterium sp.MYB03是特异性的，不能侵染实验采用的其他37株受试菌。而MYSP08与MYTP08具有共同的宿主菌Havobacterium sp.MYB08，不能侵染其他的受试菌株。
2.2噬菌体电镜形态观察
噬菌体电镜形态及噬菌斑特征见图1，噬菌体MYSP03与MYSP08都为头尾复合结构，头部呈立体对称。MYSP03头部直径为76.5nm，尾管长约260nm，尾管直径约10nm(表2)，末端具有呈螺旋状弯曲的尾板结构，这与之前的报道存在细微误差(直径约74nm，尾管长约240nm)。MYSP08头部直径约66nm，尾管长约180nm，尾管直径与MYSP03相仿；而噬菌体MYTP08只有衣壳结构清晰可见，直径约58am，未见尾管结构。因此，从形态学上将噬菌体MYSP03和MYSP08归属于长尾科噬菌体，MYTP08归属于复层噬菌体科。
2.3物理及化学因素对噬菌体活性影响
2.3.1温度对噬菌体增殖活性的影响
实验表明(图2)：MYSP03、MYSP08和MYTP08均可在4 20℃感染其宿主菌并于双层平板上产生边缘清晰、透明的噬菌斑，培养24h后噬菌斑直径为2～4mm。MYSP08和MYTP08在25℃时仍可感染它们共同的宿主菌Flavobacterium sp.MYB08并产生少量子代噬菌体。6个不同温度条件下，MYSP08和MYTP08均在l5℃时产生的子代噬菌体量达到最高，初步确定这两株噬菌体最适增殖温度为15℃。前期报道中，噬菌体MYSP03的最适增殖温度为10oct。
图1噬菌体电镜形态及噬菌斑特征
(A)MYSP03噬茵斑；(B)MYSPO8噬茵斑；(C)MY'IT08噬茵斑；(D)MYSP03宿主茵形态；(E)MYSP03；(F)MYSP08；(G)MYrn)08；(H)MYSP08和MYTP08宿主茵形态。
图2温度对噬菌体增殖的影响
以相对效价P，Pn表示，Pn代表噬茵体MYSPo8和MYTP08的原始效价.P代表在不同温度下培养6h后的效价。
2.3.2热稳定性分析
噬菌体MYSP08和MYTP08在低于4O℃的情况下非常稳定，结果见图3，超过40℃时，两株噬菌体的存活率均呈直线下降趋势。60℃处理30min，噬菌体MYTP08的’活Jl生几乎完全丧失，而MYSP08也只有不到10％的存活率；70oC处理30min时，两株噬菌体均完全失活，这与之前报道的噬菌体MYSP03相符3株低温噬菌体的热稳定性都较差。
2.3.3 pH敏感性
由图4可知，MYSP08在pH 5～8稳定性较好，经处理仍有92％以上的噬菌体存活，尤其在pH 7～8时，其稳定性几乎不受影响。MYTP08对pH的耐受范围为pH 3-9，在pH 5—6时稳定性最好。噬菌体MYsP08、MYTP08和已报道的MYSP03同样都具有较宽的pH适应范围。
图3噬菌体M YSP08与M YTP08热稳定性
以相对效价P／P0表示，P0代表噬茵体MYSP08和MYTP08的原始效价.P代表在不同温度下处理30min后的效价。
图4 pH对噬茵体MYSP08与M YTP08的影响
以相对效价P／Pn表示，代表噬茵体MYSP08和MYTP08的原始效价，P代表在不同pH缓冲液中处理1h后的效价。
2.3.4化学试剂敏感性
噬菌体MYSP08与MYTP08经不同化学试剂处理，稳定性差异较大。由图5可见：MYSP08对氯仿及非离子型去垢剂TritonX-100不敏感，经处理后存活率可达60％以上，对离子型去垢剂SDS较敏感，经终浓度为0.1％(wt／v)的SDS于5O。处理6min后只剩约10％的噬菌体存活，对蛋白酶K极其敏感，处理后几乎全部失活，这与已报道的MYSP03结果相似，表明噬菌体对化学试剂的敏感性主要受其组成结构的影响。噬菌体MYTP08对氯仿、去垢剂及蛋白酶K均很敏感，经处理，其存活率分别只剩7.4%、8.1%、17.5%和0.8%，与MYSP03和MYSP08不同，MYTP08对氯仿敏感，表明其衣壳结构可能具有脂质包裹。
2.4噬菌体MYSP03吸附速率
噬菌体纯培养液的初始效价为1*109pfu/mL，由吸附速率曲线可知（图6）：当MOI为10℃，15℃温育2 min就有近80%的MYSP03颗粒吸附到宿主细胞，MYSP08和MYTP08的被吸附数量也超过了70%。温育6 min后，3株噬菌体被吸附的颗粒数量均高达97%，温育10 min后，混合液中的噬菌体颗粒几乎全部吸附到了宿主菌细胞上。因此，3株噬菌体对宿主均具有较强的吸附能力。
2.5噬菌体MYSP03最佳感染复数
不同MOI下培养结果见图7。当MOI=0.1时，噬菌体MYSP03感染其宿主菌Flavobacteriumsp.MYB03所产生的子代噬菌体效价为4.42伊109pfu/mL，在6个MOI中产出最高，因此确定MYSP03与其宿主的最佳感染复数为0.1。MYSP08和MYTP08均能特异性感染宿主菌Flavobacterium sp.MYB08，但分别在MOI为10和1时产生的子代噬菌体数量最多，因此确定其最佳感染复数分别为10和1。
2.6噬菌体一步生长曲线
由3株噬菌体的一步生长曲线（图8）可以看出，当MOI=10℃，15℃振荡培养，3株噬菌体表现出明显不同的潜伏期、裂解期，MYTP08尤为突出，其潜伏期约90 min，裂解期约30 min，在3株噬菌体中潜伏期最长而裂解期最短。实验中被感染的宿主菌的初始浓度为2*107cfu/mL，根据公式：裂解量=裂解末期噬菌体效价衣感染初期宿主菌浓度，可以计算得出3株噬菌体感染其宿主菌的裂解量分别是57、71和137（表1）。
图8 3株噬菌体一步生长曲线
以相对效价LogP，Pn表示，代表噬茵体MYSP08和MYI1Po8的原始效价.尸代表所测得培养体系中噬茵体的效价。
表1 3株噬菌体感染宿主的潜伏期、裂解期和裂解量