1.2实验方法
1.2.1菌种的保藏及处理将毛霉O-1、M-4接种至察氏琼脂斜面培养基，曲霉A-1、A-2，酵母Y-11接种至PDA琼脂斜面培养基，枯草芽孢杆菌KC接种至LB琼脂斜面培养基，并在对应培养条件下活化、培养，活化后在4℃保存备用。
1.2.2菌株的筛选将各菌株接种至豆粕发酵培养基。真菌置于28℃，细菌置于37℃培养2d，55℃烘干粉碎，检测纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶的酶活力。
1.2.3菌株鉴定及保藏菌株采用18S rRNA基因序列测定法进行菌株鉴定，由上海美吉公司执行。所述菌株已于2015年3月24日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CTCC NO：M2015155。
1.2.4发酵条件优化用无菌生理盐水将菌种扩繁培养基上的孢子洗脱下来，调节孢子密度至1×108个/mL，接种于发酵培养基，接种量为1mL。设置4个因素，以不接种的豆粕发酵培养基为对照，3个重复，分别优化料水比、发酵温度、营养因子和发酵时间。
料水比7个，分别为：1∶0.7、1∶0.8、1∶0.9、1∶1、1∶1.1、1∶1.2和1∶1.3，发酵条件pH不调节、28℃、40h。固定料水比1∶1.1，设置发酵温度5个，分别为25、28、31、34和37℃。固定料水比1∶1.1和31℃发酵温度，设置营养因子5个：1%K2HPO4+1%NaCl、2%(NH4)2SO4、2%葡萄糖、2%尿素和2‰K2HPO4+2‰NaCl+2‰(NH4)2SO4+1%葡萄糖+2‰尿素。固定料水比1∶1.1，添加完整营养因子(2‰K2HPO4、2‰NaCl、2‰(NH4)2SO4、1%葡萄糖、2‰尿素)，固定发酵温度31℃，设置发酵时间6个：22、28、31、34、37和40 h。
发酵结束后，55℃烘干，粉碎后密封备用。
1.2.5检测方法
纤维素酶活力测定参照王琳等的检测方法；木聚糖酶活力测定参照费迪波；果胶酶活力测定参照陈小湘；蛋白酶酶力测定参考赵彩艳；蛋白质用凯氏定氮法，可溶性氮总含量的测定用TCA-NSI法。
1.2.6数据处理
用SPSS16.0 for windows对数据进行单因素方差分析。若差异显著，则用Duncan检验法进行多重比较，显著水平为P<0.05。
2结果与分析
2.1菌株筛选
不同菌株产酶种类和所产酶的活力不同。比较纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、蛋白酶酶活力筛选菌株。由图1可知，A-1木聚糖酶活力低于A-2(P<0.05)，但其纤维素酶、果胶酶和蛋白酶活力显著高于其他菌株(P<0.05)。因此，从整体角度考虑，我们选取A-1为豆粕发酵菌株。
2.2菌株A-1的鉴定结果
菌株A-1在PDA平板上的菌落呈橄榄褐色，菌落反面为土黄色至黄褐色，绒毛状，放射性分布，成熟后产生黄褐色孢子。对A-1的18S rRNA基因序列进行测定后再在NCBI中使用Blast进行比较，发现菌株A-1的18S rRNA基因序列与Aspergillus awamori(KF922319.1,GenBank)和Aspergillus niger(KF758784.1,GenBank)的基因序列同源性为100%，结合菌株的形体学特征，确定菌株A-1为泡盛曲霉(Aspergillusawamori)。
2.3发酵条件优化
研究结果表明料水比显著影响A-1发酵豆粕性能(P<0.05)。料水比从1∶0.7到1∶1.3，A-1先提高发酵豆粕蛋白质含量后降低其含量。料水比1∶1.1时，发酵性能最好，发酵豆粕蛋白含量最高(见图2)。因此，料水比1∶1.1最佳。最佳料水比时，温度显著性影响A-1豆粕发酵性能P<0.05)。从25～37℃，A-1先显著提高豆粕蛋白质含量，然后降低。28和31℃时，发酵性能最好，显著提高豆粕蛋白含量(P<0.05)。31比28℃更显著缩短发酵时间。因此，31℃为最佳发酵时间。
图1不同菌株的酶活力
不同营养盐也显著性影响A-1发酵豆粕性能。2%尿素和全营养成分时，A-1显著增加豆粕蛋白质含量，全营养盐时可溶性氮指数(TCA-NSI)最高(见图3)。因此，最佳营养因子为全营养盐。发酵时间显著影响A-1发酵豆粕性能。从22～40h，豆粕蛋白质含量呈现先升高后降低趋势。34和37h时，发酵豆粕蛋白质含量显著高于时间。37～40h时，发酵豆粕可溶性氮指数显著高于其他时间(P<0.05)。因此，最佳发酵时间为37h。
综上，泡盛曲霉的最适发酵条件为：料水比为1∶1.1，发酵温度为31℃，发酵时间为37h，添加的营养因子为2‰K2HPO4、2‰NaCl、2‰(NH4)2SO4、1%葡萄糖、2‰尿素。
图2料水比和温度对A-1发酵豆粕蛋白质含量的影响
图3营养因子(A)和时间(B)对A-1发酵豆粕蛋白质含量和可溶性氮指数(TCA-NSI)的影响