臭鳜鱼由鳜鱼腌制而成,气味特别,且保留了鳜鱼的本味原汁,肉质醇厚,是我国独具风味的传统水产制品。因为水产制品生产的集中、季节性及原料的易腐性,采用腌制这种传统加工方法,不仅保存了水产品丰富的营养价值,而且产生了独特的口感和风味。将腌制水产制品中的优势微生物分离筛选出来,应用于腌制水产制品的加工中,可缩短腌制水产制品的生产周期,提高产品质量与品质,因此,对腌制水产制品中优势微生物的研究非常有必要。
乳酸菌能赋予腌制水产制品柔和的酸味和香气,改善产品风味,促进发酵的成熟,提高制品的营养价值和功能性。从传统水产制品中筛选优势乳酸菌的研究国内外已有很多,近年来,国内外学者自传统发酵鱼制品、北海淡口腌制金丝鱼、醉鱼、湘西传统酸鱼、fish-nukazuke、som-fak,pleasom和Plasom等中分离出乳酸菌,符合水产品发酵的生产要求。
本实验以具传统特色的臭鳜鱼为原料,依据肉制品发酵剂的筛选标准,从中分离筛选鉴定优良的乳酸菌菌株以及16S rDNA序列分析等实验与研究,以期得到适合生产发酵鱼肉制品的优良菌株,为开发新型臭鳜鱼制品奠定基础。
1材料与仪器
1.1实验材料
臭鳜鱼,购于安徽黄山市与沈阳市徽菜馆。
1.2主要培养基与试剂
MRS培养基;筛选培养基;糖发酵细菌生化鉴定管,杭州天和微生物试剂有限公司;细菌基因组DNA提取试剂盒(离心柱型),天根生化科技(北京)有限公司。
1.3仪器设备
电热手提式高压杀菌锅,上海医用核子仪器厂;XS-212生物显微镜,南京江南永新光学有限公司;CR-21G冷冻离心机,日本HITACHI日立;PHS-25型pH计,上海雷磁仪器厂;SP-2100UV型紫外分光光度计,尤尼柯上海仪器有限公司;DNA扩增仪,美国BIO-RAO。
2试验方法
2.1菌株的分离培养
无菌操作,依据GB/T9695.19-2008,称取臭鳜鱼样品10.0 g,用灭菌剪剪碎后加入装有90 mL无菌水和一定数量玻璃珠的三角瓶中,振动摇晃30 min,以此作为稀释度为10-1的样品液。用无菌水做梯度稀释。无菌吸取1 mL适宜浓度稀释液至培养皿中,倒入适量含有2%的CaCO3的MRS固体培养基覆盖稀释液,轻轻转动平板,使菌液与培养基混合均匀,冷凝后倒置,37℃培养48 h。
肉眼观察,选取分布较好的平板,挑取分离较好的有代表性的单独菌落,经多次划线分离直至获得纯菌落。将纯化后的疑似菌落培养物接种于MRS斜面培养基上,37℃分别培养24 h后,置于4℃冰箱内保藏待用。
2.2菌株的形态学观察
观察平板上疑似菌落的形态、大小、色泽等。
挑取疑似菌落培养物涂片,进行革兰氏染色试验和过氧化氢酶检验,于×100倍油镜下观察细菌的染色结果和疑似菌株的形态。