1.2培养基
人工海水(%，w/v):NaCl 2.5，MgSO40.5，KCl 0.1，CaCl20.02，K2HPO40.01，FeSO40.002;牛肉膏蛋白胨培养基(%，w/v):蛋白胨1，牛肉膏0.3，琼脂粉1.5，NaCl 0.5，pH7.2～7.6;初筛培养基:2216 E固体培养基;复筛培养基(%，w/v):琼脂粉0.2，酵母浸出粉0.3，人工海水配制，pH7.2～7.6;斜面培养基:同初筛培养基
1.3菌株的筛选
取样地点是青岛红岛近海海域。取近海沉积物于无菌密封袋中，常温保存。取沉积物样品5 g于45 mL无菌水中，振荡摇匀。将稀释10-1～10-5五个浓度梯度的样液分别涂布在牛肉膏蛋白胨平板培养基中，30℃培养1～2 d，挑取透明圈或凹陷较大的菌落点接于初筛平板培养基，并做好标记，在30℃下培养1～2 d后用卢戈氏碘液进行染色，挑选透明圈与菌落的直径比值大的菌落，并根据标记挑取原菌落于初筛培养基上进行划线培养1～2 d，挑取单菌落于复筛液体培养基中，30℃，150 r/min发酵培养1～2 d，测发酵液的酶活力，筛选出酶活力较高的菌株，并进行斜面和甘油管保藏。
1.4琼胶酶活力测定
于25 mL比色管中加入0.5 mL经4℃6000 r/min离心10 min的发酵上清液和1.5 mL含0.5%琼脂的磷酸盐缓冲液(pH7.0)，置于50℃水浴保温15～20 min后取出，加入1.0 mL DNS试剂终止酶解反应，沸水浴显色5 min，冷却后定容至25 mL，充分摇匀后于5000 r/min离心10 min，取适量上清液在520 nm处测吸光值，将酶液煮沸灭活后同此法处理作为对照。根据标准曲线算出上清液中的还原糖含量。酶活力单位定义为在上述条件下，1 min转化生成1μg还原糖所需酶的量为一个酶活力单位(U/mL)。
1.5菌体生长和产酶曲线的测定
以3%的接种量将种子液接种到发酵培养基，150 r/min，30℃摇床发酵培养，每2 h取适量发酵液测生物量及酶活力，绘制生长曲线和产酶曲线。
1.6菌种形态学鉴定
观察菌落在平板上的形态并对其进行卢戈氏染色、革兰氏染色并镜检观察菌体形态等。
1.7系统发育树的构建
CTAB法提取菌株基因组DNA，将收集得到的DNA为模板，引物采用通用引物27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-GGCTA CCTTGTTACGACTT-3′)。PCR扩增程序为95℃2 min;94℃30 s，55℃30 s，72℃1 min，35个循环;72℃10 min。将PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测，送至上海生工生物工程有限公司测序。利用BLAST程序在GenBank上对结果进行相似性比对，使用MEGA6.0的Neighbor-Joining(NJ)方法构建系统发育进化树。
1.8酶学性质研究
最适温度的测定:在20～70℃下测定酶活力，其中底物浓度0.5%、反应体系pH7.0;最适pH的测定:在pH4.0～9.0下测定酶活力，其中酶解温度是45℃、底物浓度为0.5%;最适底物浓度的测定:在底物浓度0.1%～1.0%下测定酶活力，其中酶解温度45℃、反应体系pH7.0;金属离子对酶解反应的影响:将琼胶酶酶液中分别加入Mn2+(MnCl2)、Ca2+(CaCl2)、Ba2+(BaCl2)、Na+(NaCl)、K+(KCl)、Mg2+(MgCl2)、Fe2+(FeCl2)使酶溶液含有5 mmol/L的金属离子，4℃放置10 min后测定酶活力。以上实验做三次平行，结果取平均值。
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