松针精油作为天然防腐剂,目前研究主要集中在食品防腐方面,对青贮饲料中微生物抑制效果的研究尚未见报道。因此,本试验旨在研究松针精油对青贮饲料中主要微生物(嗜酸乳杆菌、梭状芽孢杆菌、酵母菌、串珠镰刀菌)的抑制效果,为松针精油在青贮饲料抑菌方面的应用提供一定的理论依据。
菌种:嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilusCICC6075)、酵母菌(Saccharomyces cerevisiaeCICC1810)、梭状芽孢杆菌(Bacillus fusiformisCICC10067)、串珠镰刀菌(Fusarium moniliformeCICC2490)
将供试菌种(嗜酸乳杆菌、梭状芽孢杆菌、酵母菌、串珠镰刀菌)培养至对数生长期,取出部分菌液,分为对照组和松针精油组,对照组将菌液直接用相应的液体培养基稀释到菌体个数为105~106CFU/ml;精油组将菌液加到含精油浓度为最低抑菌浓度的液体培养基中,继续培养。分别在0、4、8、12、16、20、24、28、32、36、48 h取样测活菌数,制作出对照组生长曲线和精油组生长曲线。
图1松针精油对嗜酸乳杆菌生长曲线的影响
由图1可知,对照组嗜酸乳杆菌的生长曲线完全符合“S”型生长曲线,有明显的迟缓期、对数期、稳定期和衰亡期。在0~4 h处于迟缓期,4 h~16 h进入对数生长期,16~24 h进入稳定期,从24 h之后进入衰亡期,最大活菌数为1.08×109CFU/ml。加入松针精油之后,嗜酸乳杆菌的迟缓期仍为0~4 h,而对数生长期延长至20 h,并且最大活菌数较对照组增加27.36%。可见,松针精油对嗜酸乳杆菌并没有起到抑制效果,反而起到了一定的促进作用,延长了对数生长期,导致菌体数量达到了一个新的峰值,并且延缓了衰亡期的到来。
图2松针精油对酵母菌生长曲线的影响
由图2可知,对照组酵母菌的生长曲线符合微生物正常的生长规律,有明显的迟缓期、对数期、稳定期以及衰亡期。在0 h~8 h处于迟缓期,8 h以后进入对数生长期,24 h以后进入稳定期,32 h以后进入衰亡期,最大活菌数为6.7×108CFU/ml。加入松针精油之后,酵母菌的迟缓期被延长,延长至16 h,16 h以后进入短暂的对数生长期,而且对数生长期的菌体数量没有达到正常的峰值,其最大活菌数较对照组降低56.72%,并经过短暂的稳定期,迅速进入衰亡期。因此,可以看出,松针精油对酵母菌有着较强的抑制作用,破坏了酵母菌的生长规律,迟缓期时间变长,较大幅度地降低了对数生长期菌体的生长峰值。
图3松针精油对串珠镰刀菌生长曲线的影响
由图3可知,对照组串珠镰刀菌在0~16 h处于生长迟缓期,16~36 h处于对数生长期,36~48 h处于稳定期,最大活菌数为2.5×109CFU/ml。在加入松针精油后,串珠镰刀菌生长迟缓期延长到24 h,对数生长期缩短到32 h,并且菌体数量的峰值较对照组菌体降低39.68%。由以上分析可看出,松针精油对串珠镰刀菌的生长有着极为明显的抑制效果,能较长时间的抑制串珠镰刀菌的生长,缩短了对数生长期菌种的生长时间,大幅度降低最大活菌数。
图4松针精油对梭状芽孢杆菌生长曲线的影响
由图4可知,对照组梭状芽孢杆菌的生长曲线符合“S”型生长曲线,在0 h~8 h处于迟缓期,8 h~24 h处于对数生长期,24 h~32 h处于稳定期,32 h~48 h处于衰亡期,最大活菌数为8.8×108CFU/ml。加入松针精油后,迟缓期延长到12 h,对数生长期缩短,最大活菌数较对照组菌体降低61.14%,并且经过短暂的稳定期,迅速进入衰亡期。可见,松针精油对梭状芽孢杆菌有一定的抑制作用。
生长曲线法可通过微生物的生长曲线反映群体的生长规律,揭示药物的抑菌效力,并从中判断药物对微生物产生的效果等各种信息[21]。本试验结果显示,对照组菌体的生长曲线符合“S”型生长曲线,遵循微生物正常的生长规律。而添加松针精油之后,酵母菌、梭状芽孢杆菌以及串珠镰刀菌的生长受到抑制,迟缓期延长,对数生长期缩短,并且最大活菌数较对照组有较大幅度的下降。
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