本文对普遍采用的四爿藻生物量累积时期生长状况的评价方法进行比较，旨在寻找适合于评价四爿藻生活史运动时期细胞生长状况的准确、简便、快捷的方法。
1、实验
1.1材料
实验所用藻种为3个不同种的海洋四爿藻：朱氏四爿藻(TetraselmischuiWH01)、心形四爿藻(T.cordiformisWH02)，采自山东省青岛市沿海地区；大四爿藻(T.helgolandicaWH03)，采自浙江省象山县。藻种由中科院武汉植物研究所藻种库提供。
1.2四爿藻的培养
将3种四爿藻藻种接种于改良的适合于水产养殖的四爿藻培养基中，置于RH-150-G型恒温光照培养箱中(20±2)℃下持续光照培养，光强2000～4000 lx，摇床转速120 r·min-1。
1.3四爿藻的生长评价
1.3.1细胞计数
分别取待测的四爿藻培养物(培养前6 d)，用Lugol氏固定液固定，血球计数法计数。每样品重复4次，求平均值，绘制生长曲线。
1.3.2叶绿素含量测定
采用快速微量提取法进行，略作改动。离心收获不同生长期的四爿藻培养物，加入95%乙醇研磨(补足体积)后室温下抽提4～6 h，离心取上清，乙醇重提，直至抽提充分(共抽提3次)。合并上清，用722型分光光度计检测OD649和OD665值。根据下面公式计算叶绿素a(Chl a)、叶绿素b(Chl b)的含量(μg·mL-1)，每样品重复4次，求平均值，绘制生长曲线并与细胞计数法绘制的生长曲线进行比较。
Chl a含量=13.7×OD665-5.76×OD649
Chl b含量=25.8×OD649-7.6×OD665
1.3.3特定光密度值测定
采用722型分光光度计直接测定四爿藻培养物在不同波长(560 nm、625 nm、750 nm)下的光密度值，绘制生长曲线，并与细胞计数法绘制的生长曲线进行比较。
1.3.4数据处理及分析
采用Origin v6.0作图，分析生长曲线的差异，并对3种四爿藻据叶绿素a的平均含量绘制的生长曲线进行回归，并与细胞计数法得到的生长曲线回归结果进行比较。
图1朱氏四爿藻(A)、心形四爿藻(B)、大四爿藻(C)的生长曲线(根据几组特定光密度值绘制)
图2朱氏四爿藻(A)、心形四爿藻(B)、大四爿藻(C)的生长曲线(根据叶绿素a、b含量绘制)
结论
通过测定3种四爿藻的细胞数目、叶绿素a和叶绿素b的含量变化及几种波长下的特征光密度吸收值，分别绘制生长曲线。结果表明，叶绿素b含量变化和OD560、OD625、OD750变化与生长趋势不太吻合，而叶绿素a含量变化和细胞数目变化较为一致，呈现较为规则的指数生长曲线。表明了利用叶绿素a含量变化可评价四爿藻生长状况。此外，叶绿素a含量测定方法较为直接，只需取少量细胞(1 mL即可)经过乙醇简单抽提，再测定光密度值，方法简便、快捷，较适合大规模海产养殖的需求。
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