母乳源乳酸菌是配方奶粉中应用前景广阔,在配方奶粉中适当添加低聚糖及母乳源益生菌能够模拟母乳的肠道菌群导向作用。本文比较母乳源乳酸菌的低聚糖利用特性,以筛选对母乳源乳酸菌具有生长促进作用的低聚糖,为配方奶粉的开发提供理论参考。
实验仪器:
BXP-16恒温培养箱,上海力辰邦仪器科技有限公司;JF-SX-500型全自动灭菌锅,日本TOMY公司;SW-CJ-1FD型超净工作台,苏州净化设备有限公司;PHS-25型酸度计,上海雷磁仪器厂;FP-110-C型全自动生长曲线分析仪,芬兰Bioscreen公司;1510型酶标仪,美国Thermo公司。
母乳源乳酸菌的低聚糖利用特性比较
母乳源乳酸菌在添加不同低聚糖MRS液体培养基的生长曲线如图1所示。4株副干酪乳杆菌M48、M60、M64、M71在以菊粉和低聚果糖为唯一碳源的MRS培养基中的OD600均高于葡萄糖组,其中副干酪乳杆菌M60在低聚半乳糖培养基中的生长速率也高于葡萄糖组(图1-a~图1-d),最大生物量为1.149,高于阳性对照组(表1),说明副干酪乳杆菌对菊粉及低聚果糖的利用情况普遍较好,部分菌株还可以利用低聚半乳糖,这可能是由于低聚果糖和菊粉都是由β-D-呋喃果糖连接,副干酪乳杆菌的β-果糖苷酶能利用低聚果糖和菊粉[13]。
鼠李糖乳杆菌M53在各种低聚糖培养基中生物量均显着低于MRS组(图1-e),说明鼠李糖乳杆菌M53仅可以较好利用低聚半乳糖,对低聚果糖、菊粉等低聚糖的利用较弱(表1),这与LANGA等[14]研究结果基本一致。植物乳杆菌M113的整个生长周期中,在低聚果糖及低聚半乳糖培养基中的OD600值均略高于阳性对照组(图1-f),说明M113可以较好利用低聚果糖及低聚半乳糖,而陈韫慧等[15]发现植物乳杆菌AR514对菊粉的利用度最高,说明乳酸菌在利用低聚糖时存在菌株特异性。
2株双歧杆菌在低聚半乳糖和水苏糖培养基中的OD600值均高于阳性对照组(图1-g和图1-h),说明它们能很好的利用低聚半乳糖和水苏糖。尽管低聚木糖被称为“超强双歧因子”[16],但grx05、S16在低聚木糖中的OD600值仅为0.076和0.065,几乎没有生长,说明本研究中母乳源不同种的双歧杆菌对低聚糖的利用情况类似,且与上述文献中的菌株不同。所有菌株在2′-岩藻糖基乳糖、低聚木糖中的生长曲线和阴性对照组较接近,且OD600值均低于0.300,与其他实验组及阳性对照组存在显着性差异(P<0.05),说明8株母乳源乳酸菌对2’-岩藻糖基乳糖和低聚木糖的利用均较弱。尽管2′-岩藻糖基乳糖能够调节婴儿肠道菌群[17],本文分离到的母乳源乳酸菌均无法利用2′-岩藻糖基乳糖,说明人乳低聚糖中的成分并非全部能够促进母乳源乳酸菌的生长,可能存在调节免疫、黏附等功能[18]。
表1不同低聚糖作为碳源时母乳源乳酸菌的最大生物量
由表2可知,副干酪乳杆菌M49、M60、M64、M71在低聚果糖和菊粉培养基中的最大比生长速率均显着高于MRS组(P<0.05),说明了4株副干酪乳杆菌对低聚果糖和菊粉的利用速率较高。鼠李糖乳杆菌M53在所有实验组的最大比生长速率均低于阳性对照组,低聚半乳糖组的最大比生长速率为0.335/h,说明M53对低聚糖利用情况整体较弱,仅在低聚半乳糖中生物活力较强。植物乳杆菌M113在低聚果糖作为发酵底物时的最大比生长速率提高幅度较大,另外,在以水苏糖为碳源培养时的最大比生长速率也较高,说明M113对低聚果糖及水苏糖的利用速率较强,可能是由于M113的β-呋喃果糖苷酶、α-半乳糖苷酶活力较高[19]。2株双歧杆菌低聚半乳糖组和水苏糖组的最大比生长速率显着高于其它实验组(P<0.05),其中,两歧双歧杆菌S16这2组的最大比生长速率高于阳性对照组,说明双歧杆菌对低聚半乳糖和水苏糖的利用较强。
表2不同低聚糖作为碳源时母乳源乳酸菌的最大比生长速率单位:h-1
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