3.3 ML对PEDV感染3D4/21细胞基因相对表达量的影响
PEDV主要编码三种结构蛋白，分别为PEDV-S、PEDV-M、PEDV-N。本试验中，细胞培养液中全时添加ML使PEDV-S、PEDV-M、PEDV-N基因的相对表达量显著下调（P<0.05），表明全时添加ML可以抑制病毒的复制。然而感染后添加ML却促进了病毒的复制，该结果说明病毒感染前添加ML可能会影响病毒的吸附和入侵，进而影响病毒的复制水平。
IL-6是一种细胞因子，其水平的变化可反映宿主炎症程度。有研究表明，当机体受到损伤后会产生炎性反应，使IL-6水平提高，受到治疗后IL-6水平明显下降，从而抑制炎性反应。IL-8是一类可溶性蛋白质，其生物功能主要涉及炎症反应的调节。当受到外界刺激（细菌、病毒、真菌等生物因素或者氧化应激和非生物因子）时，将会激活相关通路，从而调控IL-8 mRNA的表达，参与组织损伤。IFN-β是I型干扰素的一种，其在宿主防御病毒感染和癌症免疫检测中都起着至关重要的作用。有研究表明，在坦布苏病毒感染时添加外源性的IFN-β，发现IFN-β能抑制坦布苏病毒的增殖。病毒入侵机体后通过与模式识别样受体（PRRs）结合，激活下游信号通路，促进IFN-β的释放。干扰素可以进一步调控下游信号分子，促使抗病毒基因，如MXI和ISG15的表达，从而起到抗病毒的效果。MX1蛋白能够通过GTP酶活性水解病毒核外壳。而ISG15参与了干扰素刺激因子的修饰过程，它有两个主要功能：一种是泛素样功能，能够结合和调节靶蛋白；另一种是自由形式功能，可以在细胞内分泌或作用，主要与细胞因子的产生和免疫细胞的激活有关。IFITM是干扰素的负调控因子，研究表明，它通过抑制病毒包膜与宿主细胞膜的融合，从而抑制病毒的入侵，也能通过促进转录因子IRF3自噬性降解，负调控RLRS介导的I型干扰素产生的信号通路，而IFIT则通过抑制病毒的转录与复制，从而阻断病毒繁殖。
本试验中，在PEDV感染3D4/21细胞24 h时，IL-6、IL-8和IFN-β基因的相对表达量显著上调，说明此时病毒感染已经引起宿主的先天免疫反应，同时，抗病毒蛋白（如MX1、ISG15、IFIT1、IFITM1和IFITM3）基因的相对表达量显著上调，这可能是PEDV颉颃宿主的固有免疫结果。而在PEDV感染3D4/21细胞12 h时，相关的干扰素抗病毒蛋白（MX1、ISG15、IFIT1和IFITM1等）的基因转录水平没有显著性变化，可能是此时PEDV已经建立复杂的免疫逃逸机制，以利于其在宿主细胞生存复制。这一观点在MLRSV感染猪肺泡巨噬细胞模型上也得到了证实。这也可能是PEDV在感染3D4/21细胞12 h达到最高复制水平的原因。根据病毒的生长曲线，可以看出12 h是病毒基因表达水平最高的时间点，但此时的细胞形态并没有像Wang等试验中的IPEC细胞出现明显病变，这可能是因为3D4/21是巨噬细胞的一种，其固有免疫反应比肠上皮细胞强，也说明了先天免疫系统介导的反应是宿主抵抗疾病的一个重要因素，随着感染时间的延长，机体的天然免疫水平也逐渐增强。PEDV感染24 h使IFN-β基因及抗病毒基因MX1、ISG15、IFIT1、IFITM1和IFITM3的相对表达量显著上调，然而ML处理24 h后，这些基因的相对表达量均显著下调，这表明ML加快了3D4/21细胞免疫状态的恢复，从而使天然免疫基因的相对表达量恢复或趋近于control组水平。
MMP13是一种致力于软骨降解的蛋白酶，其在肿瘤细胞的恶化、侵袭等生物学行为方面起着重要作用。本试验中，PEDV感染12 h后使3D4/21细胞MMP13基因的相对表达量显著上调；添加ML后，3D4/21细胞MMP13基因的相对表达量显著下调，说明ML可缓解PEDV感染带来的损害，提高机体修复损伤的潜力。KCNJ13是一种钾离子内向整流蛋白，会通过协助扩散的方式运输葡萄糖、氨基酸等离子。
在本试验中，PEDV感染后添加ML处理12 h，3D4/21细胞KCNJ13基因的相对表达量显著下调，说明ML可以改善腹泻造成的离子通道损伤，使肠道离子平衡。
ML预处理细胞3 h后再进行病毒感染，可以显著降低PEDV基因mRNA水平，说明病毒在3D4/21细胞中的表达受到抑制。ML属于一种中链脂肪酸，前期已有大量的关于ML抗病毒效果的报道，蒋增良研究发现，0~150 mg/kg的ML可诱导C57/BL6小鼠（4周龄）系统内低度炎症，使得促炎因子TNF⁃α、IL-6、IL-1β含量显著升高，抗炎因子白细胞介素-10（IL-10）含量显著降低，进一步说明ML具有抗病毒和缓解炎症反应的作用。本试验中，ML对PEDV病毒感染引起的基因相对表达变化有显著性的回调作用，说明本试验条件下，ML发挥了一定的抗病毒和抗炎的作用，但具体作用机理还有待进一步研究。
4结论
综上所述，在本试验条件下3D4/21细胞培养液中ML的适宜添加浓度为10μmol/L；PEDV可以在3D4/21细胞中复制增殖，其中在病毒感染细胞的12 h时病毒基因的相对表达水平最高；PEDV感染24 h可以促进3D4/21细胞炎性因子和免疫因子的表达，全时添加ML可在一定程度上抑制病毒增殖，并且有助于机体免疫状态的恢复。
十二酸单甘油酯对PEDV感染3D4/21巨噬细胞活性、基因表达的影响（一）
十二酸单甘油酯对PEDV感染3D4/21巨噬细胞活性、基因表达的影响（二）
十二酸单甘油酯对PEDV感染3D4/21巨噬细胞活性、基因表达的影响（三）
十二酸单甘油酯对PEDV感染3D4/21巨噬细胞活性、基因表达的影响（四）