目的：通过使用三氧化二砷（As2O3）诱导雌激素受体（estrogen receptor，ER）的再次表达，通过对乳腺癌细胞生长曲线的研究来探讨ER在阴性乳腺发展过程中的作用。方法：本研究以ER阴性的人乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象，采用免疫组化、生长曲线检测法等生物学方法来检测ER在阴性乳腺癌发展过程中的作用。结果：以MCF-7作为阳性对照，免疫组化结果显示，As2O3可以诱导ER的再次产生。进一步观测MDA-MB-231细胞的生长曲线，发现ER可明显抑制其生长，与对照组相比，有显著性差异（P<0.05）。结论：ER的再表达可抑制阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长。
实验步骤
免疫组化：（1）细胞爬片。取对数生长期的细胞进行常规消化制成单细胞悬液，加入到预先已经放置盖玻片的24孔板中，每孔加入预先计算的细胞悬液量，放入培养箱中进行培养。培养24h后，取出盖玻片，PBS洗干净，风干。冷丙酮固定10min.（2）加入3%HZOZ适量，37℃，30min，以用来清除内源性过氧化物酶的影响；洗干净；山羊血清封闭；加入ER抗体，过夜；洗干净，加辣根酶标记的链霉卵白素，37℃，30min，洗干净；DAB显色，显微镜下观察；自来熟洗涤，苏木素染色，冲洗反蓝；酒精脱水，二甲苯透明，封片。用PBS代替一抗制成阴性对照。MCF-7作为阳性对照。
Westem Blot实验：（1）提取细胞的总蛋白。收集经过不同处理的尽量多的细胞，预冷的1×PBS洗3次，800g，离心5min/每次。弃上清，加入细胞裂解液适量，置于冰上裂解10min，每隔2min吹打一次，800g，离心5min。（2）吸取上清利用己准备好的标准曲线计算出浓度并进行WB实验。
生长曲线实验：将对数生长期的MDA-MB-231细胞调整细胞浓度为5×105/mL，换含As2O3的培养液，至As2O3终浓度分别为5.0μmol/L，连续培养48h。采用电子监控技术监测其生长变化。
ER对MDA-MB-231乳腺癌细胞株生长曲线的影响。
实验分为两组（contrl组，即未经As2O3处理；实验组，经As2O3处理），采用电子检测探究ER对MDA-MB-231乳腺癌细胞株生长曲线的影响。结果如图3所示，处理后细胞生长曲线变得平缓，细胞生长受到抑制，提示我们或许ER抑制了MDA-MB-231细胞的生长。
生长曲线结果提示我们ER可抑制乳腺癌细胞的生长，这或许可以为临床治疗ER阴性患者提供一定的思路。
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