洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）是一种广泛存在于水、土壤、植物和人体中的革兰氏阴性杆菌。作为条件致病菌，能引起多种医院感染，包括败血症、心内膜炎、肺炎、伤口感染和脓肿等，且该菌在患者和患者之间具有较强的传播能力，由于其多重耐药特性，治疗相当困难，一旦在医院内出现暴发流行很难控制。目前该菌已经被FDA明确为不可接受微生物（objectionable microorganism），根据FDA网站数据显示，从2019年1月至2021年8月因微生物污染被召回的26批化妆品中，有8批被洋葱伯克霍尔德菌污染，占比高达31%。笔者将实验室近三年来微生物检测不合格化妆品中污染菌分离鉴定后发现，洋葱伯克霍尔德菌的检出率远高于《化妆品安全技术规范》中要求的金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌，可见目前国内化妆品被洋葱伯克霍尔德菌污染的风险较高。
在各领域现行的标准体系中，洋葱伯克霍尔德菌定性检验方法有3种：SN/T 4684—2016《进出口化妆品中洋葱伯克霍尔德菌检验方法》、SN/T 4485—2016《进出口口腔清洁类产品中洋葱伯克霍尔德菌检验方法》及USP＜60＞Microbiological examination of nonsterile products-test for Burkholderia cepacia complex。而笔者在化妆品中分离到的一株洋葱伯克霍尔德菌，在上述3种检验方法中的选择性培养基中均无法生长，如果污染了该分离菌的样品采用这3种方法检验，则无法检出，因此提升化妆品中洋葱伯克霍尔德菌检验方法的适用性很有必要。本文以该样品分离菌及3株洋葱伯克霍尔德菌标准菌株作为测试菌，选取3种标准中使用的液体培养基，开展生长特性研究；并通过测试庆大霉素对各试验菌的最低抑菌浓度，非目标菌抑制试验以及药敏试验等，分析了该分离菌无法被检出的主要原因，确定检验方法中最优的抗生素添加剂，并以此为依据对化妆品中洋葱伯克霍尔德菌的检验方法提几点改进建议。
1仪器与材料
1.1仪器
MSC-Advantage A2型生物安全柜，BF400恒温培养箱，GF54DA立式自动压力蒸汽灭菌器。
1.2菌株
洋葱伯克霍尔德菌：1株为本实验室从样品中分离获得（编号A，同下文），另3株标准菌株分别为ATCC 25416、ATCC BAA-245及ATCC BAA-247，来自美国典型菌种保藏中心。
非目标菌：金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、大肠埃希菌CMCC（B）44102、乙型副伤寒沙门氏菌CMCC（B）50094及铜绿假单胞菌CMCC（B）10104，均来自中国医学细菌菌种保藏管理中心。
1.3培养基及配套试剂
1.3.1 USP＜60＞培养基
pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液（pH7.0），TSB以及洋葱伯克霍尔德菌选择性琼脂（BCSA++）均来自广东环凯。
1.3.2 SN/T 4684—2016培养基
含庆大霉素的洋葱伯克霍尔德菌增菌液（BCSB+），含多黏菌素B的SCDLP增菌液（SCDLP+），含多黏菌素B和庆大霉素的洋葱伯克霍尔德菌选择性琼脂（BCSA+）及含多黏菌素B和庆大霉素的麦康凯琼脂培养基（MAC+）来自青岛海博。
1.3.3 SN/T 4485—2016培养基
SCDLP，改良letheen肉汤（MLET）来自广东环凯，BCC培养基（BCA++）来自北京三药。
1.3.4配套试剂洋葱伯克霍尔德菌选择性琼脂（BCSA）配套试剂来自广东环凯，BCC培养基配套试剂来自北京三药。
1.3.5其他培养基TSA、麦康凯琼脂培养基（MAC）均来自广东环凯；TSA对照培养基来自中检院。
1.4试剂
（1）生理盐水：按GB 7918.1—1987依法配制。
（2）庆大霉素溶液（1 mg/mL）：购自青岛海博。
相关新闻推荐
2、麦芽醇提物对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的生长曲线的影响与抑制效果
3、乙脑病毒株囊膜蛋白I176R位点在BV-2细胞上的生长特性差异——摘要、前言