近年来，关于吸烟对人体危害的研究越来越深入。研究表明，吸烟可引起多种常见疾病，如肺癌、支气管炎、肺气肿、心血管疾病等。此外，口腔是人体富含正常微生物群的部位，口腔微生态环境中微生物的数量和种类很易受外界环境的影响。然而，目前国内外针对香烟对口腔中微生物及相关疾病影响的研究却相对较少，且结果相互矛盾。有研究认为香烟可改变口腔微环境从而有利于微生物的生长，增加口腔白斑及牙周疾病的发病率;也有研究认为香烟对口腔微生物没有明显影响，甚至还有研究认为吸烟可促进链球菌等口腔常见细菌的生长。因此，本文采取不同的方法观察香烟对口腔微生物的影响，研究香烟与其生长之间的关系，以客观评价香烟对口腔微生物的作用。
1材料与方法
1.1材料
试验菌株为大肠埃希菌(ATCC25922)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、铜绿假单胞菌(ATCC 25668)、白色假丝酵母(ATCC14053)、草绿色链球菌(自行分离);尼古丁(上海源叶生物科技有限公司)，香烟(泰山宏图，焦油量12 mg，烟气烟碱量1.1 mg，烟气一氧化碳量1.2 mg，山东中烟工业有限责任公司生产);营养琼脂、血琼脂平板、磷酸盐缓冲液(PBS，pH 7.4)、麦氏比浊管(0.5个单位)等为自行配制。
1.2方法
1.2.1菌液的制备将上述菌株接种在相应培养基上，分离出单个菌落，分别选取其单个菌落混悬于生理盐水中，稀释至0.5麦氏单位的浊度，备用。
1.2.2尼古丁对口腔常见微生物的影响将尼古丁用PBS稀释为400、40μg/mL;取40μL已稀释的菌液置于无菌EP管中，按1∶1的比例分别与400、40、0μg/mL的尼古丁均匀混合，置于恒温震荡器中(37℃，220 r/min)震荡作用6 h，将草绿色链球菌与各浓度尼古丁的混合液按照1∶1000比例进行稀释。同理，大肠埃希菌、金黄色等等球菌、铜绿假单胎菌、白色假丝酵母菌等菌液混合液按照1∶1000、1∶1000、1∶1000、1∶100比例进行稀释。分别取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色假丝酵母菌的稀释液50μL滴于普通平板中，倾倒适量已高压灭菌的保温60℃的营养琼脂(白色假丝酵母菌用沙保罗琼脂)，轻轻晃动平板使之均匀混合，待其冷却后，置于恒温培养箱内37℃培养24 h;取草绿色链球菌与尼古丁的混合液50μL置于血平板表面，将菌液涂抹均匀，放置于恒温培养箱内37℃培养48 h。取出上述培养物查看生长情况并进行菌落计数，各菌均设3个重复。
1.2.3烟草浸出液对口腔微生物的影响将20支香烟的烟丝取出，置于装有50 mL无菌蒸馏水的洁净离心管内，37℃水浴24 h，5000 r/min离心15 min，取上清液用0.22μm的滤菌器过滤除菌，然后进行1∶10、1∶100稀释，参照1.2.2的方法使菌液与烟草浸出液混合作用6 h后，分别采取琼脂稀释法和涂布法进行菌落计数。
1.2.4烟雾提取物对口腔微生物的影响将无菌蒸馏水20 mL置于水烟漏斗中，使水烟漏斗的出气口与真空泵相连;取10支已去掉过滤嘴的香烟依次插于水烟漏斗进气口处并点燃，开启真空泵使其燃烧产生的烟雾进入水烟漏斗并溶解于无菌蒸馏水，每只香烟均控制在10 min左右燃烧完。将水烟漏斗中的烟雾水溶液倒入试管中，进行高压蒸汽灭菌。将灭菌后的烟雾水溶液用0.22μm的滤菌器过滤除菌，并进行1∶10、1∶100稀释，参照1.2.2的方法将菌液与烟草浸出液的混合作用6 h后，分别采取琼脂稀释法和涂布法进行菌落计数。
1.2.5吸烟对志愿者口腔中微生物的影响召集青岛大学医学院2011级吸烟(平均吸烟10支/d，时间为3 a以上)和不吸烟的男生各25名，清晨待志愿者使用课题组统一提供的牙膏刷牙后，每名志愿者取10 mL生理盐水漱口30 s，分别吐入洁净的无菌纸杯中;取1 mL漱口液置于试管中，然后稀释1000倍，将稀释液各取50μL涂布血平板表面，放入37℃孵箱培养48 h，观察不同形态的菌落，并通过革兰染色和生化试验对出现频率较高的菌落进行初步鉴定，分别进行计数。
1.2.6统计学处理采用SPSS12.0软件进行，方法为两独立样本资料的t检验，方差不齐时用t'检验。
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