桑黄，又名鲍氏层孔菌Phellinusigniarius，是目前发现的生物抗癌领域有效率最高的大型真菌。目前在桑黄的研究与开发中，频频出现“同物异名”、“同名异物”的现象，在文献中和已经作为产品提供的鉴定标本中当作“桑黄”使用的种有12个，造成了名称和应用上的混乱。针对这一现象，本研究对收集到的8种不同来源的桑黄菌株进行了菌丝体生长特性的研究，旨在对其亲缘关系远近进行初步鉴定，为今后对桑黄的研究与开发奠定基础。
1 供试材料
表1 供试菌株编号及来源
1.1 供试菌种
均由陕西科技大学生命科学与工程学院微生物菌种室提供，菌种编号及来源如表1所示。
1.2 供试培养基
斜面培养基、平板培养基均为综合PDA培养基。
2 试验方法
2.1 培养基的制备
参照参考文献进行。
2.2 菌种的培养
2.2.1 菌种纯化
按照无菌操作的要求，取一块菌种转接于平板培养基中央，置28 ℃恒温培养。待菌丝生长3——6 d，取菌落边缘纯净的一小块菌块转接到斜面试管中培养。如此反复几次，可使菌种达到纯化及活化的效果，满管后于4 ℃冰箱中保存备用。
2.2.2 菌种扩培
按照上述方法进行试管转接培养，待菌丝长满后放4 ℃冰箱中保存备用。
2.2.3 培养观察
将活化好的菌种按无菌操作的要求分别转接至斜面和平板培养基上，28 ℃恒温培养，每2 d观察1次，记录菌丝萌发快慢、生长速度、菌落大小、菌丝颜色、长势等特征（每组做6个平行取均值）。
平板菌丝长速（mm/d）=菌落半径（mm）/菌丝生长天数（d）斜面菌丝长速（mm/d）=菌丝长度（mm）/菌丝生长天数（d）
2.2.4 拮抗试验
按照无菌操作的要求，将活化好的8种桑黄菌点接于平板培养基上，每个平板均匀接入3种菌株，每组合3个平行，28 ℃恒温培养7——10 d，观察菌丝间是否有拮抗现象发生，拮抗线是否明显，并拍照记录。根据拮抗线的宽度、颜色等特征，可以鉴别菌株的差异大小。
3 结果与讨论
3.1 菌丝生长特性比较
图1 斜面和平皿培养基菌丝形态示例
表2 不同菌丝生长特性比较
注：+++菌丝生长势强，++菌丝生长势一般，+菌丝生长势弱。
由图1和表2可以看出，8个菌株中，R、H、S7的长势最好，其次为S、S6和S8.长势较好的菌株日平均生长速度较快，长势弱的菌株生长速度较慢。不同菌株的菌落形态及菌丝颜色也有差异，H、W、S8、S1的菌丝颜色较深，且易产生色素，S7和S菌丝生长到后期表面会有油状分泌物出现，这些特征均是伴随菌龄的增加而产生的。
通过对菌丝生长过程的观察，菌丝生长速度呈现先慢后快而后又慢的趋势。这是由于新接入的桑黄菌株对新环境有一个适应过程，所以生长比较缓慢；当接种5 d左右的时候，新接入的桑黄菌株已适应新的生长环境，这时由于环境中营养成分充足，所以桑黄菌种开始在培养基上迅速生长，进入快速生长阶段；当培养到后期的时候，由于培养基中的营养及氧供给的限制，菌丝的生长速度变慢，有些菌丝进入老化阶段。
图2 拮抗试验示例
3.2 拮抗试验结果与分析
表3 拮抗实验结果分析
注：+拮抗现象不显著，++拮抗现象显著，+++拮抗现象非常显著。
通过图2和表3可以看出，S1与W；S6与R；S7与S8；H与S之间拮抗线不明显，说明它们之间的亲缘性较近；而S6与H、W、S；S7与H、S；S8与H；R与W、S；H与W；W与S之间拮抗线明显，亲缘性较远。
4 结束语
本试验从形态培养观察和拮抗试验分析两个方面对8种不同来源的桑黄菌株进行了比较，初步得出其亲缘关系的远近，为以后的试验和研究奠定了基础。但由于此方法易受环境条件等因素的影响，应用于桑黄的种性鉴定中还存在缺陷，因此在后续的研究工作中还需对其做进一步的研究与分析。