1.2.3生长曲线的测定
取250mL三角瓶，装入100mL无菌营养肉汤培养基，按5%的接种量加入枯草芽孢杆菌种子液，混匀，并在37°C下以180rpm的振荡速度孵育，当细胞密度达到OD600 0.3时，将180μL培养物转移至100孔板的每个微孔中，其中含有20μL 10倍连续稀释的噬菌体。将板立即置于Bioscreen C自动生长曲线分析仪上。在接入菌种后的0 h、1.5 h、3 h、4h、6h、8h、10h、12 h、14 h、16 h以及20 h无菌条件下取出适量培养液，通过测量细菌的吸光度（OD600），可以了解噬菌体感染对细菌生长的影响，记录结果并以时间为横坐标，OD420为纵坐标绘制生长曲线。每组3个重复，试验重复3次。
1.2.4耐酸性试验
以pH值为7.4的PBS缓冲液为基础的营养肉汤，用稀盐酸调节pH值为2.0、3.0、3.5、4.0、5.0、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0的培养基。取枯草芽孢杆菌菌液1mL加入9mL上述梯度pH值的营养肉汤培养基中，对照组则加入9mL的灭菌生理盐水。置于37℃、180 r/min振荡培养箱中培养1 h，分光光度计420 nm波长处测定OD值，将不同pH值的OD值与相应空白对照OD值之比记为该菌株的存活率。每组3个重复，试验重复3次。
1.2.5耐高温试验
在营养肉汤培养基中按5%的接种量加入枯草芽孢杆菌种子液，分别置入37℃、70℃、80℃、90℃和100℃水浴锅中作用10min，冷却后于37℃恒温振荡培养箱中培养9、15和20 h，测定其OD420值，观察和记录生长情况。每组3个重复，试验重复3次。
1.2.6耐胆盐试验
在胆盐浓度分别为0%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%的液体营养肉汤培养基中，按5%接种量加入枯草芽孢杆菌，于37℃震荡培养箱恒温培养18 h，在420 nm波长下测定吸光度，不同胆盐浓度的OD420值与相应空白对照OD420值之比为该菌株的存活率。每组3个重复，试验重复3次。
1.2.7发酵试验
1.2.7.1菌液的制备
将10mL含有0.1%吐温80的无菌水分别倒入枯草芽孢杆菌斜面培养基上，用接种环将斜面上的菌种和孢子刮下，置入盛有90mL无菌水的三角瓶中，用磁力搅拌器将其搅拌均匀，适当稀释，使密度达到1×107cfu/mL。
1.2.7.2菌液的接种
饲料经粉碎后，过60目筛，称取60 g饲料装入100mL三角瓶中，高压灭菌25min。冷却后将饲料粉打散，接入1×107cfu的发酵种子液，37℃恒温培养箱培养。每组设3个重复，试验重复3次。
1.2.7.3发酵饲料的酸度及酶活性测定
发酵饲料的酸度、淀粉酶活性、蛋白酶活性和纤维素酶活性测定主要参照钟青萍等、吴胜莲等和国家轻工行业、农业部酶活力测定相关的行业标准方法进行。
1.2.8数据处理
检测不同处理组和对应对照组在OD420波长时的吸光度，用两者的比值代表芽孢杆菌存活率。数据以平均值±标准差表示，采用SPSS 13.0软件进行数据分析，两组间的差异显著性比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1枯草芽孢杆菌的形态学观察
该株枯草芽孢杆菌呈革兰氏阳性，在接种后12 h内，杆端钝圆，单生或呈短链状（图1-A）。在接种后48 h，出现芽孢，且芽孢一般生在菌体中间或两端，呈椭圆形或长筒形（图1-B）。呈现典型的枯草芽孢杆菌形态特征。
图1菌株的形态观察
2.2菌株的生长曲线和抗逆性能观察
对生长曲线观察发现，该菌株无明显的生长延滞期，生长对数期为0～6 h，生长稳定期为6～10 h，生长衰亡期为第10小时以后（图2-A）。以1.5 h的OD420为标准，不同时间点的OD420值与其均差异极显著（P＜0.01）。
菌株分别经37℃、70℃、80℃、90℃和100℃水浴处理10min后，在培养的9、15和20 h测定菌液OD420，发现随着处理温度的升高，同一时间点的吸光度下降（图2-B）。但在培养9 h后，吸光度与37℃处理组相比差异不显著（P＞0.05）。而在培养15 h和20 h后，不同处理组与37℃处理组间差异极显著（P＜0.01）。存活率则随处理温度的升高而逐渐降低，分别为90.83%、86.81%和87.26%。
该菌株在pH值为2的培养基中培养时存活率最低，仅为59%，说明酸性环境对其生长有一定的影响。随着培养液pH值的逐渐升高，存活率明显增加。在培养液pH值为7.5时，菌株的存活率最高，达150%（图2-C）。说明该菌株最适宜在中性环境中生长。
该菌株在胆盐浓度分别为0、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%和0.5%的液体营养肉汤培养基中培养18 h，存活率随胆盐浓度升高而逐渐降低。最高为131.22%，最低为115.45%，但均高于100%，说明该菌株具有较强的耐胆盐能力（图2-D）。
图2菌株生长特性观察
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