2实验结果与讨论
2.1耐盐菌生理生化性质
菌株NM-1为长杆状,革兰氏阴性,在耐盐碱分离培养基上,菌落呈圆形、湿润、光滑,菌落为黄色,可利用葡萄糖、乳糖和蔗糖,氧化酶以及过氧化氢酶阳性,理化性质见表1.
表1菌株NM-1生理生化性质
注:“+”为阳性;“~”为阴性
2.2不同pH对菌株生长的影响
在不同pH(8.0、9.0、10.0、11.0、12.0)条件下,利用耐盐菌富集培养基对菌株NM-1进行培养,每隔24 h测定培养液吸光度,绘制成时间~吸光度曲线,结果如图1所示。
由图1可以看出,在pH为8.0、9.0和10.0条件下,菌株NM-1的最大吸光度接近,分别为0.76、0.74和0.64,远远高于pH为11.0和12.0条件下的吸光度,因此,菌株NM-1的最适pH生长范围为8.0——10.0.
2.3不同NaCl浓度对菌株生长的影响
将菌株NM-1在含有10%、30%和50%NaCl的富集培养基中培养,每隔24 h测定其吸光度OD560,绘制生长曲线如图2所示。
由图2可以看出,菌株NM-1在NaCl浓度为10%和30%条件下,均在培养4 d时吸光度达到最大值,分别为0.98和0.96.而4 d后,菌株NM-1在NaCl浓度为30%条件下的吸光度明显下降至0.75.而在NaCl浓度为50%的培养条件下,菌株NM-1的生长停滞期明显延长,吸光度变化很小,且培养3 d时出现最大吸光度。因此,该菌株最大耐受NaCl的浓度为30%,为中度嗜盐微生物。
2.4不同Na2CO3浓度对菌的生长的影响
分别配制含有0.2、0.25、0.3 M Na2CO3的富集培养基,将菌株NM-1在30℃条件下振荡培养,每24 h测定培养液吸光度,绘制生长曲线如图3所示。
由图3可以看出,菌株NM-1在Na2CO3浓度为0.25 M条件下,吸光度最大,均高于0.2 M和0.3 M条件下的吸光度,而在0.3 M Na2CO3浓度下,吸光度最小,且基本没有变化,因此,菌株NM-1生长的最适Na2CO3浓度为0.25 M.
2.5细菌系统发育树
菌株NM-116S r RNA序列长度为1415 bp.将序列进行BLASTn比对及利用CustalX2.1和Mega5软件构建系统树,如图4所示。
由图4可以看出,菌株NM-116S r RNA序列与Halomonasvariabilisstrain SL121(JN645866)以及HalomonasvariabilisstrainHTG7(AY204638)序列的相似度最高,均为98%,且三者同在一个分支上,结合菌株NM-1所处的系统树位置,初步判定菌株NM-1应为盐单胞菌属(Halomonassp.)。
3结束语
盐单胞菌属(Halomonas)属于盐单胞菌科,为革兰氏阴性、好气杆菌,能在盐度为0%——32%(w/v)条件下生长。作者从黄河三角洲盐碱地土壤中分离到一株耐盐碱菌株NM-1.该菌株生长最适pH范围为8.0——10.0,最大耐受NaCl的浓度为30%,为中度嗜盐微生物,生长的最适Na2CO3浓度为0.25 M.该菌株形态特征及生理生化性质与耐盐单胞菌属基本一致,与盐单胞菌属的几个相近种相同的特征有:革兰氏阴性,氧化酶、过氧化氢酶阳性,具反硝化作用,淀粉水解阴性。结合菌株16S rDNA序列相似度以及系统分类学位置,基本判定菌株NM-1属于耐盐单胞菌属(Halomonassp.),建议命名为Halomonassp.NM-1(AB917466)。