2结果
2.1活菌计数标准曲线绘制
2.1.1假交替单胞菌WCPW15003活菌计数标准曲线
不同稀释倍数菌悬液的吸光值与其对应稀释倍数的线性方程为：y=1.8976x+0.137，r2=0.9877[x为假交替单胞菌WCPW15003稀释倍数倒数的值，y为假交替单胞菌WCPW15003稀释后吸光值(OD600)]；标准曲线方程为：y=134.36x-17.976，r2=0.9924[x为假交替单胞菌WCPW15003吸光值(OD600)，y为假交替单胞菌WCPW15003活菌菌落数]，菌液吸光值与活菌数之间有显著线性关系(图1)。因此，假交替单胞菌WCPW15003的菌悬液吸光值与其活菌数量间存在良好线性关系，可用于后续菌液密度的测定。
图1假交替单胞菌WCPW15003活菌计数标准曲线
2.1.2哈维氏弧菌PBVH3311活菌计数的标准曲线
不同稀释倍数菌悬液的吸光值与其对应稀释倍数的线性方程为：y=1.42x+0.2052，r2=0.981[x为哈维氏弧菌PBVH3311稀释倍数倒数的值，y为哈维氏弧菌PBVH3311稀释后吸光值(OD600)]；标准曲线方程为：y=5.1028x-1.2664，r2=0.9956[x为哈维氏弧菌PBVH3311吸光值(OD600)，y为哈维氏弧菌PBVH3311活菌菌落数]，菌液吸光值与活菌数之间有显著线性关系(图2)。因此，哈维氏弧菌PBVH3311菌悬液吸光值与其活菌数量间线性关系良好，可用于后续菌液密度的测定。
图2哈维氏弧菌PBVH3311活菌计数标准曲线
2.2菌株生长曲线
2.2.1假交替单胞菌WCPW15003生长曲线
假交替单胞菌WCPW15003的生长曲线符合典型“S”型细菌生长曲线。即假交替单胞菌WCPW15003的生长周期可分为停滞期、增长期、平台期和衰亡期共4个时期。其中，接种后0～0.5 h为该菌株的停滞期，0.5～1.5 h为缓慢增长期，1.5～2.5 h进入短暂平台期，2.5～10 h进入对数增长期，10～36 h进入平台期，36 h后进入衰亡期(图3)。
图3假交替单胞菌WCPW15003生长曲线
2.2.2哈维氏弧菌PBVH3311菌株生长曲线
哈维氏弧菌PBVH3311的生长曲线符合典型“S”型细菌生长曲线。即哈维氏弧菌PBVH3311的生长生长周期可分为停滞期、增长期、平台期和衰亡期共4个时期。接种后0～0.5 h进入停滞期，0.5～1.5 h进入增长期，1.5～4.5 h进入短暂平台期，4.5～20 h进入对数增长期，20～44 h进入缓慢增长期，44～68 h进入平台期，68 h后进入衰亡期(图4)。
2.3培养基优化
培养24 h后，不同假交替单胞菌WCPW15003培养基中菌悬液的密度为2.31×108～3.36×109cfu/mL(图5)。其中2216E培养基的活菌数最低，为2.31×108cfu/mL；试验组A的活菌数最高，为3.36×109cfu/mL；试验组B的活菌数为1.33×109cfu/
图4哈维氏弧菌PBVH3311生长曲线
mL；试验组C的活菌数为1.95×109cfu/mL。与对照组相比，3个试验组的菌悬液密度均极显著高于对照组(P<0.01)；尽管试验组B和试验组C间仅达到显著性差异(P<0.05)，但试验组A与试验组B或试验组C间均达到了极显著差异(P<0.01)。
图5培养基优化结果
2.4拮抗试验
当哈维氏弧菌PBVH3311密度为101～102cfu/mL时，所有组别未出现明显的拮抗效果。当哈维氏弧菌PBVH3311密度为103cfu/mL时，假交替单胞菌WCPW15003的最小抑菌密度为103cfu/mL，抑菌圈直径为(8.40±0.16)mm；当哈维氏弧菌PBVH3311密度为104、105cfu/mL时，假交替单胞菌WCPW15003的最小抑菌密度均为105cfu/mL，抑菌圈直径分别为(9.64±0.07)、(8.24±0.22)mm。拮抗作用效果为全透明抑菌圈(图6)。
当哈维氏弧菌PBVH3311密度为106cfu/mL时，假交替单胞菌WCPW15003的最小抑菌密度为107cfu/mL，抑菌圈直径为(18.15±0.09)mm；当哈维氏弧菌PBVH3311密度为107、108cfu/mL时，假交替单胞菌WCPW15003的最小抑菌密度均为108cfu/mL，抑菌圈直径分别为(18.53±1.34)、(11.68±2.58)mm。拮抗作用效果为全透明抑菌圈，外侧还有一圈半透明抑菌圈(图6)。
总之，只有当哈维氏弧菌PBVH3311≥103cfu/mL时，假交替单胞菌WCPW15003才会产生拮抗作用，且假交替单胞菌WCPW15003的密度应相当于或高于哈维氏弧菌PBVH3311的密度，拮抗作用大小与假交替单胞菌WCPW15003密度呈正相关性。
表3不同密度假交替单胞菌与哈维氏弧菌拮抗抑菌圈直径(打孔器直径5.98 mm)mm
注：表中数据为剔除掉打孔器外径5.98 mm的结果，“0”表示不产生拮抗效果.
图6假交替单胞菌WCPW15003与哈维氏弧菌PBVH3311拮抗作用效果a.假交替单胞菌；b.哈维氏弧菌；c.全透明抑菌圈；d.半透明抑菌圈.
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