阴沟肠杆菌是一种人兽共患病病原菌，其传播途径广泛，在高盐环境下仍可大量繁殖。据报道，鲻鱼、淡水鲨鱼、克氏原螯虾及罗氏沼虾等水产动物在感染阴沟肠杆菌后会出现大量死亡现象。此外，阴沟肠杆菌还可导致10日龄雏鸡、牛及绵羊大规模死亡，对养殖户造成经济损失，对养殖业构成重大威胁。如今，随着抗生素在临床治疗中的广泛应用，阴沟肠杆菌逐渐适应并对多种抗生素表现出抵抗性。阴沟肠杆菌编码多种β-内酰胺酶，如头孢菌素酶、超广谱β-内酰胺酶及碳青霉烯酶等，故其对β-内酰胺类抗生素耐药。目前阴沟肠杆菌对第一、二代头孢类及青霉素类等药物的耐药率已高达90%以上，对第三、四代头孢耐药率呈逐年增加趋势。此外，该菌还可与路德维希肠杆菌(Enterobacter ludwigii)、神户肠杆菌(Enterobacter kobei)、霍马切肠杆菌(Enterobacter hormaechei)等组合成阴沟肠杆菌复合体(Enterobacter cloacae complex)，阴沟肠杆菌复合体通常与多重耐药(MDR)表型相关，这主要是由于它们对医院环境适应以及它们容易获得许多含有抗性和毒力基因的遗传移动元件的能力。这种耐药性限制了可供选择的治疗方案，增加了治疗失败和复发风险，对临床治疗构成巨大挑战。因此，急需针对阴沟肠杆菌开发新型抗菌试剂。
裂解性阴沟肠杆菌噬菌体是天然存在的“杀菌剂”，具有高度特异性的感染和裂解能力，能在有效杀灭阴沟肠杆菌的同时大量增殖，因此噬菌体控制阴沟肠杆菌生长具有天然性、安全性和特异性。据报道，噬菌体对细菌感染的治疗已经取得良好效果，但对多种不同细菌的混合感染，宿主谱较窄的噬菌体无法消灭所有种类病原菌，治疗效果并不理想。应对这一挑战，噬菌体鸡尾酒技术应运而生，该方法将两种或以上噬菌体制作成一种混合生物制剂，旨在通过协同作用拓宽抗菌谱，增强对多种细菌的杀菌能力并降低细菌对噬菌体的抗性。目前，噬菌体vB-Ecop-S523、噬菌体Ec53等裂解效果较好的阴沟肠杆菌噬菌体已被报道，这些噬菌体的裂解效果及稳定性与噬菌体ZX14相似，但宿主谱较窄，仅可裂解特定阴沟肠杆菌，噬菌体ZX14具有较为广泛的宿主谱，可裂解阴沟肠杆菌、神户肠杆菌与路德维希肠杆菌。故有望将噬菌体ZX14与宿主谱互补、裂解效果和稳定性相仿的噬菌体组合成噬菌体鸡尾酒用于消灭阴沟肠杆菌复合体。随着科研的不断深入和技术进步，噬菌体鸡尾酒的适用范围预计将进一步扩大，因此，提炼出新遗传特征和生物学特性的噬菌体并构建一个多样化的噬菌体资源库对噬菌体临床治疗应用和发展具有至关重要的意义。
本研究以从福建水产养殖场污水中分离的阴沟肠杆菌菌株作为宿主，从扬州某水产市场污水中分离一株高抗菌活性的裂解性噬菌体ZX14，对分离噬菌体的形态结构、生物学特性、稳定性及遗传信息进行了相关分析。这些研究为临床治疗阴沟肠杆菌感染提供了一种新治疗策略，并为未来临床实践提供了新的可能性。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1菌株储存
阴沟肠杆菌2025从福建某水产养殖场水样分离而来，将细菌在3%氯化钠碱性蛋白胨水培养基(APW)中置于37℃、220 r/min培养箱震荡培养6 h，将所培养的菌液与50%甘油1∶1混合后置于-80℃保存。噬菌体ZX14由扬州水产市场所分离，将噬菌体与25%甘油1∶1混合后置于-80℃保存。
1.1.2主要试剂与仪器
APW培养基(蛋白胨10 g/L、氯化钠30 g/L)购自青岛海博生物技术有限公司;LB培养基(胰蛋白胨10 g/L、酵母粉5 g/L、氯化钠10 g/L)购自青岛海博生物技术有限公司;氯仿、氢氧化钠(片状)、浓盐酸购自国药集团化学试剂有限公司;质粒DNA小提试剂盒购自南京诺维赞生物科技股份有限公司;PCR仪购自杭州博日生物科技有限公司;抗菌药物药敏纸片购自杭州微生物试剂有限公司;离心管(50 mL)购自无锡耐斯生命科技股份有限公司;移液器、超速离心机(Centrifuge 5810 R)购自艾本德(中国)有限公司;0.22μmol/L滤器购自美国Milipore公司;无菌注射器购自江苏客乐医用器械有限公司;微量分光光度计(Nano-300)购自杭州奥盛仪器有限公司;涡旋混匀仪MX-S购自美国SCILOGEX公司;90 mm细菌培养皿购自范德生物科技有限责任公司;水浴锅购自上海邦西仪器有限公司;病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒(离心柱型)购自天根生物科技有限公司。
相关新闻推荐
3、副鸡禽杆菌生长曲线测定方法：分光光度法VS菌落计数法（二）