番茄（Solanum lycopersicum）是一种在世界范围内广泛种植的蔬菜作物。番茄病害会严重影响番茄果实的产量和品质，制约了番茄产业的发展。番茄细菌性斑点病是一种严重的细菌性病害，主要危害番茄植株的叶片、茎和果实，造成5%～75%的减产，同时影响果实的外观。近年来，我国广西等地有该病害爆发的报道，发病率高达80%。鉴于其严重的危害性，该病害已被列入我国的出入境检疫有害生物名录。
丁香假单胞菌番茄致病变种Pseudomonas syringae pv.tomato是番茄细菌性斑点病的致病菌，冠菌素（coronatine，COR）是其分泌的一种化合物。黄化症状是番茄细菌性斑点病发展后期的典型病状，外源COR处理能够诱导番茄叶片变黄，表明COR作为致病因子在病害发展过程中发挥重要作用。COR的分子式为C18H25NO4，由冠烷酸（CMA）和冠菌酸（CFA）通过酰胺键缩合而得。冠烷酸与乙烯合成前体1-氨基环丙烷-1-羧酸酯（ACC）结构类似，而冠菌酸与茉莉酸（JA）结构相似。COR与茉莉酸异亮氨酸（JA-Ile），都能与宿主细胞上的茉莉酸受体蛋白COI1特异结合。
植物内源激素在植物防御反应中发挥着重要作用，乙烯、茉莉酸和水杨酸是参与植物防御的关键激素。乙烯和茉莉酸在抵抗死体营养病原体上发挥着协同作用，而水杨酸主要介导植物抵抗半活体营养病原菌和活体营养病原体的防御反应。EIN2是一种跨膜蛋白，其半衰期很短，是乙烯信号通路的正调节因子。EIN3也是乙烯信号通路的正调节因子，定位于细胞核中，是EIN2的下游调节蛋白，作为转录因子激活乙烯响应基因的转录。脂氧合酶（Lipoxygenase，LOX）催化亚麻酸氧化生成13-氢过氧化亚麻酸，该反应是茉莉酸生物合成的第一步反应，因此LOX对于茉莉酸的生物合成至关重要，其编码基因LoxD常被作为茉莉酸通路标记基因。MYC2转录因子是茉莉酸信号通路的重要蛋白，能够激活茉莉酸信号传导途径。病程相关蛋白PR1a由水杨酸诱导产生，被用作水杨酸信号通路的标记蛋白。苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine ammonialyase，PAL）是苯丙烷代谢途径的关键酶，木质素、酚类、黄酮类等多种次级代谢产物是通过苯丙烷代谢途径生成的，这些次级代谢产物在植物防御中发挥着重要作用，因此PAL是植物体内的重要防御酶。
植物叶片是病原细菌危害植物的主要组织，细菌生长能力测定可以反映不同菌株在植物组织中的寄生能力，进而判断菌株的毒性。植物在病原菌入侵时会激活自身的防御反应，胼胝质介导的细胞壁增强是一种常见的基础防御。接种病原细菌到叶片中数小时后，可以在接种叶片的细胞壁和细胞膜之间观测到胼胝质沉积。
目前国内外对COR的研究主要集中在模式植物拟南芥上，而COR在番茄植株上的生理功能及其在细菌致病过程中发挥的作用还不是很清楚。本试验通过RT-qPCR技术测定不同浓度COR处理之后的番茄叶片的防御基因表达量，揭示了不同浓度下COR的生理功能；通过细菌生长曲线和胼胝质沉积数量的测定，并结合基因表达量的分析结果，证明了丁香假单胞菌分泌的COR能够促进细菌的毒性，初步探索了COR促进病原菌毒性增强的机理，为番茄细菌病害防控提供了理论依据。
1材料和方法
1.1试验材料
①植物：以感病番茄品种“Money maker”为试验材料，种子来源于中国农业科学院蔬菜花卉研究所馈赠。
②菌株：野生型致病菌P.syringae pv.tomato DC3000（以下简称Pto）和不能产生COR的突变体cor-，以上菌株均来源于美国俄亥俄州立大学Dr.Daivd Mackey实验室馈赠。Pto菌株携带利福平抗性，cor-菌株携带利福平抗性和卡那霉素抗性。
③试剂：冠菌素（上海西格玛奥德里奇贸易有限公司）；Trizol试剂（上海厚凯生物科技有限公司）；TB GreenTMPremix Ex TaqTMII（日本宝生物公司）；PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser（日本宝生物公司）；苯胺蓝（国药集团化学试剂有限公司）；苯酚（上海泰坦科技股份有限公司）；乳酸（上海凌峰化学试剂有限公司）；引物（上海生工生物工程股份有限公司）；配置KB培养基试剂：蛋白胨、磷酸氢二钾、甘油和硫酸镁（国药集团化学试剂有限公司）；乙醇（上海泰坦科技股份有限公司）；氯化镁（国药集团化学试剂有限公司）；利福平（上海凌峰化学试剂有限公司）；卡那霉素（上海贤鼎生物科技有限公司）。
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