2结果与分析
2.1菌株形态学分析
在MRS培养基中分离出多株乳酸菌，将其中一株菌株命名为ZJBF005，进行后续分析与鉴定。菌落呈乳白色、圆形、不透明状，大而平坦，表面光滑，边缘整齐(图1)。菌株ZJBF005为直或微弯杆状、两端钝圆、单个或成对存在、无芽孢的革兰氏染色阳性细菌。
图1菌株ZJBF005的菌落形态(左)及细胞形态(右，1 000×)
2.2菌株同源比对分析
基于16S rRNA基因序列比对结果，以酒类酒球菌(Oenococcus oeni)JCM 6125(AB022924.1)为外枝构建菌株ZJBF005的Neighbor-Joining系统发育树(图2)。由16S rRNA基因测序BLAST结果得知，菌株ZJBF005与唾液乳杆菌之间的成对序列相似度高达99.52%，因此确定菌株ZJBF005为唾液乳杆菌。
图2菌株ZJBF005系统发育树Lactobacillus aviarius subsp.araffinosus DSM 20653(AYYZ01000003):鸟乳杆菌不解棉籽糖亚种DSM 20653(AYYZ01000003);Lactobacillus aviarius subsp.aviarius DSM 20655(AYZA01000007):鸟乳杆菌鸟亚种DSM 20655(AYZA01000007);Lactobacillus hayakitensis JCM 14209(BAML0100063):早来乳杆菌JCM 14209(BAML0100063);Lactobacillus salivarius BCRC 14759(CP024067):唾液乳杆菌BCRC 14759(CP024067)。
2.3菌株生理生化特性
对菌株ZJBF005进行生理生化特性鉴定，检测结果见表2，菌株ZJBF005可利用单糖(甘露糖、山梨糖、半乳糖、木糖、果糖、鼠李糖、葡萄糖等)、二糖(纤维二糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖等)和多糖(棉子糖等)产酸。硫化氢试验、葡萄糖产气试验、淀粉水解试验、硝酸盐试验、过氧化氢酶试验和吲哚试验等结果均为阴性，V-P试验、甲基红试验和明胶液化试验结果呈阳性，此外菌株ZJBF005具有运动性。试验结果参照《伯杰细菌鉴定手册》进行比对发现，菌株ZJBF005生理生化特性与唾液乳杆菌相符。
表2菌株ZJBF005的生理生化特性
2.4菌株适宜生长温度
对在20、25、30、35、37、40和45℃环境下生长的唾液乳杆菌ZJBF005进行OD600值测定，结果如图3所示。唾液乳杆菌ZJBF005在20~45℃条件下皆可生长，适宜生长温度为37℃，其最大OD600值可达1.7。接种2 h后进入对数生长期，培养至25 h后进入生长平台期。
图3唾液乳杆菌ZJBF005不同温度下的生长曲线
2.5菌株产酸及耐酸特性
由图4可知，唾液乳杆菌ZJBF005在MRS培养液中迅速产酸，6 h内pH从5.97下降至3.28，此阶段对应该菌株的生长对数期;6~24 h内培养液pH略微降低，直至稳定在3.14。唾液乳杆菌ZJBF005的菌体数量随着pH的升高而增加，在pH为1和2的培养液中无法生长;在pH为3的培养液中生长缓慢;当pH提高为4或者更高时，菌体生长速度明显加快，菌体在pH为7的培养液中生长最佳。
图4唾液乳杆菌ZJBF005的产酸(左)及耐酸曲线(右)
2.6菌株对人工胃液和人工肠液的耐受特性
由表3可知，经3 h人工胃液培养后，唾液乳杆菌ZJBF005活菌数从8.39 lg(CFU/mL)降至3.44 lg(CFU/mL)，存活率为(40.96±0.21)%。经3 h人工肠液培养后，唾液乳杆菌ZJBF005活菌数从8.23 lg(CFU/mL)降至7.14 lg(CFU/mL)，存活率为(86.70±0.14)%。
表3唾液乳杆菌ZJBF005在人工胃液和人工肠液中的存活率
2.7菌株对胆盐的耐受特性
由图5可知，对唾液乳杆菌ZJBF005进行胆盐耐受性试验，在无胆盐培养基中菌体正常生长;在含有0.1%和0.2%的胆盐条件下培养至3 h时生长较为良好，随时间的推移菌体在0.2%的胆盐培养基中生长受到抑制，而在含有0.1%的胆盐环境下还可以缓慢生长;当胆盐浓度超过0.3%时，菌体几乎不能生长。
图5唾液乳杆菌ZJBF005的胆盐耐受性
2.8菌株对常见致病菌的抑制作用
由表4可知，通过牛津杯法抑菌试验发现，除大肠杆菌外，唾液乳杆菌ZJBF005对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均具有生长抑制作用。唾液乳杆菌ZJBF005对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑制程度相同，抑菌圈直径分别为(14±1)mm和(13±1)mm。
表4唾液乳杆菌ZJBF005抑菌试验结果
抑菌程度用抑菌圈大小表示，+++、++和+分别表示抑菌圈大小为23~30 mm、16~23 mm和9~16 mm，-表示无抑菌圈。下表同。The inhibition zone diameter shows the bacteriostatic level，+++，++and+represent the inhibition zone diameter 23 to 30 mm，16 to 23 mm和9 to 16 mm，respectively，-was no inhibition zone.The same as below。
2.9菌株的抗生素敏感性
由表5可知，利用纸片扩散法测定唾液乳杆菌ZJBF005对12种抗生素的耐药性，结果发现，唾液乳杆菌ZJBF005对青霉素G、氯霉素、头孢孟多、克林霉素、环丙沙星等抗生素敏感;而对四环素、庆大霉素、万古霉素、磷霉素、阿奇霉素、甲氧苄啶和甲硝唑等抗生素不敏感。
表5唾液乳杆菌ZJBF005抗生素敏感试验结果
2.10动物安全性试验
动物安全性试验期间，2组之间小鼠体重无显著差异，无生病或者死亡;剖检后观察其内脏均无出血现象，肝脏、脾脏均无眼观病变。这表明唾液乳杆菌ZJBF005对小鼠无毒副作用。