近年来，鼠伤寒沙门菌(Salmonellatyphimurium)的致病率呈上升趋势，每年造成数百万人感染和死亡.沙门菌主要感染肠道，症状表现为呕吐、腹泻、高烧等，重症者出现死亡.
外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)是革兰氏阴性细菌外膜(outer membrane,OM)的主要蛋白质成分,该类蛋白质在调控细胞结构和形态、营养获取、定殖和入侵以及防止抗生素等外部威胁方面发挥着关键作用.Heffernan et al研究发现，Rck基因座与革兰氏阴性菌中表达的外膜蛋白家族同源，其中2种与毒力表型相关：PagC，能提高鼠伤寒沙门菌在巨噬细胞中的存活率和毒力；Ail，是一种耶尔森氏菌染色体的产物，能够介导细菌黏附和侵入上皮细胞系.Xu et al发现，OMP的表达有助于幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)在感染初级阶段附着在胃上皮细胞上，并能增加该菌的毒力.一些来自不同革兰氏阴性细菌的OMP已被确认为宿主免疫识别的重要因素，可参与细菌多种生命活动，具有开发为疫苗的潜力.
小RNA(small RNA,sRNA)是一类可对mRNA进行调控的重要因子，参与细菌多种生命过程，如调节毒力、适应环境变化、调节OMP基因的表达等；同时，sRNA对mRNA的调节作用往往需要伴侣蛋白Hfq参与.Hfq在细菌生理功能调节中发挥着多种作用：除了协同sRNA共同作用外，还能够单独调节细菌多种基因的表达，对细菌生长、毒力、侵袭力等有影响.Sittka et al研究表明,Hfq参与兼性细胞内病原体鼠伤寒沙门菌毒力因子的表达和分泌.sRNA和Hfq可对大量的mRNA和蛋白进行调控，进而影响细菌的致病性.
FadL、OmpN、YbfM在沙门菌中均参与外膜蛋白的合成、转运、识别等过程，Hfq及sRNA RybB也被确定能对以上3个OMP基因产生一定的调控作用.但外膜蛋白FadL、OmpN、YbfM及伴侣蛋白Hfq和sRNA RybB对沙门菌致病性的影响并未完全明确.本试验利用实验室前期构建的鼠伤寒沙门菌基因缺失菌株ΔompN、ΔfadL、ΔybfM、Δhfq、ΔrybB、ΔrybB&Δhfq研究其对该菌致病性的影响，旨在为了解这些基因对沙门菌致病性的作用机制提供依据.
1材料与方法
1.1供试菌株
表1缺失菌株基因型
鼠伤寒沙门菌标准菌株LT2由法国国家科学研究中心(CNRS)分子遗传学Bossi实验室惠赠；鼠伤寒沙门菌缺失菌株ΔompN、ΔfadL、ΔybfM、Δhfq、ΔrybB、ΔrybB&Δhfq均由贵州省动物疫病研究室构建.缺失菌株基因型如表1所示.
1.2供试动物
无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级KM系雄性小鼠，18～22 g，4～6周龄，购自辽宁长生生物技术股份有限公司.在特定的无病原体条件下养殖小鼠，提供充足的食物和水.试验已通过贵州大学动物伦理和福利委员会批准(编号：EAE-GZU-2021-E005).
1.3鼠伤寒沙门菌生长曲线的测定
将鼠伤寒沙门菌标准菌株LT2及基因缺失菌株ΔompN、ΔfadL、ΔybfM、Δhfq、ΔrybB、ΔrybB&Δhfq分别接种于LB平板中复苏培养，挑取平板上单个菌落接种于液体LB中，37℃摇床中培养过夜.次日，通过紫外分光光度计(Q-5000)调整菌株的D600 nm=0.1，按照1∶100的比例取500μL菌液接种于50 mL液体LB中，37℃、170 r·min-1振荡培养，每隔1 h取1 mL细菌悬浮液，通过紫外分光光度计测D600 nm值.统计结果，并制作生长曲线图.
1.4鼠伤寒沙门菌的毒力测定
将鼠伤寒沙门菌标准菌株LT2及基因缺失菌株ΔompN、ΔfadL、ΔybfM、Δhfq、ΔrybB、ΔrybB&Δhfq分别接种于5 mL液体LB中，37℃摇床中培养过夜.次日，取100μL菌液至新的LB试管中，培养10 h，将菌液12 000 r·min-1离心5 min，弃掉上清液，通过无菌PBS重悬浮洗涤，调整菌液浓度至1×109CFU·mL-1，再梯度稀释为1×108、1×107、1×106、1×105CFU·mL-1.将小鼠随机分组，每组5只，腹腔注射菌液0.5 mL·只-1，以注射相同剂量PBS为空白组.连续15 d观察、记录小鼠死亡数，通过改良寇式法计算各菌株对应的LD50.
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