3讨论


本研究结果显示,相较于鼠伤寒沙门菌标准菌株LT2,伴侣蛋白Hfq及外膜蛋白OmpN、YbfM、FadL基因缺失菌株生长速度无变化,而rybB和rybB&hfq基因缺失菌株生长速度有所下降,但变化不显著。这说明hfq、ompN、ybfM、fadL、rybB基因对鼠伤寒沙门菌生长的影响并不大。


伴侣蛋白Hfq可调节多种细菌的毒力:hfq基因缺失会抑制大肠杆菌(Escherichiacoli)生物膜形成,降低细菌的运动性与趋化性;Hfq参与李斯特菌(Listeriamonocytogenes)的毒力作用及其生物膜的形成,hfq基因缺失会显著降低该菌的毒性;hfq基因缺失也可降低志贺杆菌(Shigella)的毒力;hfq基因缺失可使维氏气单胞菌(Aeromonasveronii)对罗非鱼鱼苗的毒力降低20倍;在模型病原体鼠伤寒沙门菌中,hfq基因缺失会降低该菌感染小鼠、侵入上皮细胞、分泌毒性因素和在巨噬细胞内生存的能力。本研究结果表明:hfq基因缺失株对小鼠的毒力降低;小鼠腹腔注射该基因缺失菌株后,肝脏和脾脏组织中的载菌量降低。这说明hfq基因缺失降低了鼠伤寒沙门菌的致病性。


有研究认为,sRNA RybB的主要功能是抑制OMP的生物合成,这种sRNA受σE的调节,σE控制细胞生成中相关基因的表达,以响应OMPs和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)成分的变化。Bearson et al通过敲除omrA、omrB、rybB、micA、invR及rfaH等构建了沙门菌疫苗BBS 866.本研究结果显示:rybB基因缺失菌株对小鼠的毒力轻微降低;小鼠腹腔注射该基因缺失菌株后,肝脏和脾脏组织中的载菌量轻微降低。这说明rybB对鼠伤寒沙门菌毒力具备一定调控作用,但调控能力没有hfq基因强。而rybB和hfq同时缺失所产生的毒力与hfq缺失所产生的毒力相似,推测当hfq基因缺失时,与hfq相关的sRNA对细菌的作用会减弱甚至消失。


病原菌表面的外膜蛋白具有良好的免疫原性和免疫保护作用,常被作为潜在蛋白疫苗进行研究。ompN合成的孔蛋白OmpN属于1型普通孔蛋白,具有高度免疫性和保护性,即使在鮰爱德华氏菌(Edwardsiellaictaluri)与沙门菌中也存在这样的免疫原性。该蛋白在物质跨膜运输过程中发挥重要作用,可增强细菌对相关药物如卡那霉素、四环霉素等的敏感性,提高肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)的致病性。FadL蛋白质家族负责将疏水化合物输送到细菌外膜,促使长链脂肪酸与高分子质量脂肪酸结合并允许这些化合物穿过外膜;还可抑制FadR毒性的表达,参与沙门菌致病岛(SPI-1)的Ⅲ型分泌系统(T3SS),当沙门菌fadL基因缺失后,毒力显著增强。YbfM是一种假定外膜壳二糖蛋白,参与细胞外化合物(包括抗生素)的吸收,与多种耐药表型有关。本研究结果表明:ompN、ybfM、fadL基因缺失可导致鼠伤寒沙门菌的毒力出现不同程度上升;小鼠腹腔注射这些基因缺失菌株后,肝脏和脾脏的载菌量与标准菌株LT2差异不显著。


综上所述,伴侣蛋白Hfq、sRNA RybB缺失可降低鼠伤寒沙门菌的致病性,因此,可将其作为鼠伤寒沙门菌的减毒疫苗进行深入研究。ompN、ybfM、fadL基因缺失导致鼠伤寒沙门菌致病性增强,这些外膜蛋白影响沙门菌致病性的机制还有待进一步探究。


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