本文拟通过心肌细胞系的体外培养，绘制生长曲线，初步探讨在高原体外培养动物心肌细胞的可行性和细胞的生长特性，为高原病研究提供实验基础。
细胞计数和生长曲线法检测细胞增殖
细胞接种当天计为0d，在培养的1-15d间每天下午16点取3块平皿的细胞用血球计数板进行细胞计数。
使用CCK8试剂盒检测细胞增殖情况，调整细胞浓度为1×105后接种于96孔板，每孔加入100μL单细胞悬液，分别在培养的1-15d间，每天取5个孔检测，检测时每孔加入10μLCCK8溶液，细胞培养箱内继续孵育1h，用酶标仪在450nm测定吸光度。
细胞增殖能力
在心肌细胞体外培养的不同时间点，采用CCK8法绘制生长曲线(见图)，从图中可见0-1d天内曲线呈现下降趋势，1-7d曲线平缓上升，7-11d曲线急剧上升，11d后曲线逐渐变得平直且有下降趋势。
图高原环境体外培养心肌细胞生长曲线
表1不同时间点培养体外培养心肌细胞细胞数(xˉ±s)
心肌细胞随培养时间延长，数量不断增加，在第5d时细胞数较第1d时增加了3倍，第7d时细胞再次倍增之后细胞进入快速生长时期到第11d时细胞数达到顶峰，以后进入平台期（见表1）。
讨论
目前我国对高原病细胞水平的研究主要侧重于非高原地区模拟低氧条件的研究[1]。模拟的低氧条件与高原现场环境有很大的差异，例如缺氧持续的时间、全天内不同时段氧分压的细微改变、不同季节氧分压的变化以及温度、湿度等情况都是难以模拟的，所以在高原现场开展细胞水平、分子水平的研究对深入探讨高原病的发病和病理机制较模拟条件下研究更有意义且更加有助于对疾病的认识。
本研究在西藏大学高原医学实验中心完成。采用单一样本观察的方法对高原环境体外培养的心肌细胞生长特性进行研究。一般来讲体外培养细胞的生长过程分为潜伏期、对数生长期和平台期三个阶段,本研究中结果显示，心肌细胞在高原条件下的生长曲线也分为三个阶段，第一阶段为潜伏期，该时间段正是细胞处在损伤修复、环境适应和贴壁等过程，所以“生长曲线”从初接种的0d时有下降表现，1d时“生长曲线”趋于平缓，2d时“生长曲线”有上升趋势；从第3d起可见曲线逐步上升说明细胞进入了快速生长期即第二阶段对数生长期，在这一阶段细胞活力旺盛、增殖活跃、数量倍增明显；随着时间的进一步推移从第11d开始曲线逐渐变得平直且有下降趋势即进入第三阶段平台期，这一阶段细胞数量基本维持在恒定水平。从以上三个阶段可以看出高原现场进行细胞培养较以往文献报道[2-3]的非高原环境培养细胞所需的时间长且细胞生长的各个时段也较非高原地区要长[4-5]，推断这一现象可能与高原低压低氧有关。
相关新闻推荐
1、基于生长曲线分析存活菌株判断细菌和链霉菌对紫外线的耐受性能
2、酱香型白酒堆积酒醅中分离克罗彭斯特德菌生长和挥发性化合物代谢特征（一）
3、基于面包酿酒酵母和拟南芥从天然提取物中筛选出生物刺激剂替代品