沙门氏菌是肠杆茵科中的一类重要菌属,Eberth(1880)和Gaffky(1884)最早发现了霍乱杆菌,1885年Salmon和Smith从患霍乱病的猪体中分离出猪霍乱杆菌,Lignieres在1900年为了纪念猪霍乱杆茵的共同发现者Salmon D.E,将本菌属定义为沙门氏菌属。沙门氏菌属为革兰氏阴性直巧菌,菌体大小通常为(0.7-1.7 um×(2.0-5.0)um,最适生长温度为37摄氏度,兼性厌氧,通常具有周身鞭毛,能运动,能发酵葡萄糖等糖类产酸。本论文主要就血清类型对沙门氏菌株生长行为和形成肠沙门氏菌生物膜的能力的影响。研究相关沙门氏菌生物膜的形成和生长动力学的相关参数,为食品加工领域提供关于如何有效避免控制沙门氏菌的生长及繁殖提供相关理论指导。


全自动生长曲线分析仪的应用


应用芬兰的Bioscreen-C全自动生长曲线分析仪测试了沙门氏菌在肉汤培养基中培养的生长曲线图,测试了各种沙门氏菌在胰蛋白胨培养基肉汤中生长的相关OD420-580值,其中的OD值是每隔两小时测试一次,培养过程中摇晃、生长及OD值的测试全是自动完成的,并且能够长时间对于不同类型的沙门氏菌菌株生长情况进行测定,并计算出相应的增长率。


实验结果


研究了血清类型对沙门氏菌菌株生长行为和形成肠沙门氏菌生物膜的能力的影响。确定了生物膜形成与沙门氏菌的生长动力学的关系参数。本研究共收集到10种血清型(S.enterica serotype Typhimurium,S.Newport,S.Paratyphi B,S.Poona、S.Derby、S.Infantis、S.Enteritidis、S.Virchow、S.Agona、S.Typhi)共69株菌株(61株家禽分离菌株和8株参考菌株)进行了检测。检测到了具有强生物膜形成沙门氏菌菌株。而试验沙门氏菌株的生长动力学与其血清型有关。本实验室中所有的沙门氏菌菌株都具备在聚苯乙烯微孔板上产生生物膜的能力(采用结晶紫染色法)。结果表明经检测的S.enterica型分离菌株具有较高的致病性,这类菌株具有在聚苯乙烯表面形成生物膜的能力。其中S.Agona and S.Typhi serotypes菌株对于生物膜的形成能力是相当大的。当环境中存在S.Agona或S.Typhi类型的沙门氏菌菌株时,必须需要注意在食品加工环境中有效控制沙门氏菌的繁殖及生长。

图1、不同血清型的肠道沙门氏菌形成的生物膜能力对应的OD580光密度值

图2、根据沙门氏菌产生生物膜的能力(弱、中、强)对69株沙门氏菌株其进行了分类。从表中可以看出,不同菌株具有不同的生物膜形成能力,其中S.Agona和S.Typhi两种类型的沙门氏菌株的在聚乙烯孔中形成的生物膜能力远远高于其他类型的菌株。

图3、不同血清型肠道沙门氏菌菌株(10种)在胰蛋白酶大豆汤培养基中的生长曲线。培养温度为37度,测试周期为48个小时。从图中可以看出Typhi沙门氏菌株生长的较慢,而Paratyphi B沙门氏生长得较快。

图4、69株肠道沙门氏菌的微生物计数与OD420-580值的相关性函数图,从图中可以看出OD值与其微生物计数法测试值的线性相关性为95%,基本是线性相关的。

图5、69株肠道沙门氏菌菌株在基于24小时培养后的OD24h(培养24小时后的OD420-580)及其生物膜的形成(24小时的培养后采用结晶紫染色法测试的OD580)和这些菌株的最大的生长速率(OD420-580/h)的三维函数关系图。


总结


沙门氏菌成为全球范围内危害么众健康最主要的食源性致病菌,其毎年都会引起多起食物中毒事件。沙口氏菌在食品加工的接触表面形成的生物菌膜可引发大范困的交叉巧染。尤其是本论文的研究发现沙门氏菌菌株在塑料表面能够产生的生物膜的能力很强,尤其是S.Agona和S.Typhi serotypes这两种沙门氏菌株的生物膜的生产力很强,本论文应用了芬兰Bioscreen C公司开发的全自动生长曲线分析仪研究不同血清类型的沙门氏菌株在含有肉汤培养基中的生长情况,通过测试这些沙门氏菌株的OD420-580值来判断不同类型的沙门氏菌株的生长速率。由于Bioscreen C全自动生长曲线分析仪具有可以实现对不同菌株培养过程中摇晃、生长及OD值的测试全部是自动完成,而常规的酶标法测试OD值需要一个一个的去测试,因此该设备的高通量方法也为研究人员节省大量时间,并提供了非常可靠的关于沙门氏菌株的生长数据,这也为研究人员确定了两种沙门氏菌株机制在塑料表面形成生物膜的能力,为研究人员在今后在食品加工过程中如何有效的避免沙门氏菌株的繁殖生长提供了重要的理论支持,这说明全自动生长曲线分析仪Bioscreen C为研究人员在食品安全性研究的方面的开发提供了重要的技术支持。


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