铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)存在于自然界中，是人体内常见的机会致病菌，同时也是最容易产生生物膜的革兰阴性杆菌之一。近年来，由于抗生素的广泛使用，导致其耐药性菌株频繁出现。碳青霉烯类抗生素通常被用作临床干预由铜绿假单胞菌引起的多重耐药感染的最后手段。大量耐碳青霉烯铜绿假单胞菌的出现给临床治疗带来极大的挑战。
铜绿假单胞菌严重影响免疫功能低下的患者，是造成接受化疗的中性粒细胞减少性癌症患者菌血症和败血症的主要原因，在各种皮肤感染中包括糖尿病足、烧伤创面、角膜溃疡、外耳道感染性中也经常出现。此外，患有囊性纤维化的患者通常会慢性感染铜绿假单胞菌，最终导致患者因肺功能衰竭而死亡。
噬菌体(bacteriophage，phage)是一类感染细菌的病毒，其结构简单、数量庞大、分布广泛，在治疗抗生素耐药细菌方面，噬菌体有潜力作为抗菌剂用于多重耐药菌引起的感染。噬菌体具有裂解能力强、繁殖快、成本低、不易产生耐药性等特点不仅可以高效裂解细菌，还可以与多种抗生素协同作用，增强杀菌效果。目前已经有多个噬菌体以及噬菌体与抗生素联合应用于临床并治疗成功的案列，故噬菌体疗法被认为是一种最具有希望用来对抗日益严重的耐药细菌的生物防控手段。
铜绿假单胞菌Pa021的分离及鉴定
实验菌株是从江苏省妇幼保健院污水处理中心分离获得。取少量污水样本涂布至血平板上，35℃培养过夜。次日，挑取单菌落，四区划线至血平板上，直至菌落生长均一。于VITEK进行细菌鉴定及药敏试验，确定为铜绿假单胞菌，将其命名为Pa021。铜绿假单胞菌Pa021药敏结果见表1。铜绿假单胞菌Pa021菌落生长形态见图1。
图1是实施例宿主菌铜绿假单胞菌Pa021的菌落生长状态图。
图2是噬菌体Phage_Pae01的一步生长曲线图。
噬菌体Phage_Pae01的一步生长曲线
随机挑取1个宿主菌Pa021单菌落，接种至LB液体培养基中，37℃摇床培养至对数早期；噬菌体与细菌按照MOI为0.01混合，室温反应8min，10000rpm离心30s，留沉淀；吸取3mL LB液体培养基吹打沉淀，室温10000rpm离心30s，留沉淀后再次吹打；最后，用预热的5mL LB液体培养基充分重悬；随后在37℃、180rpm的恒温摇床中培养；开始计时，每隔5min取样一次取至30min，然后每隔10min取样一次，取5次至100min，取出的100μL样品12000rpm离心2min后收集上清；所得滤液置于4℃冰箱中，100min后，将各个时间所得的滤液倍比稀释，双层琼脂平板法测滴度，实验重复3次。得知：噬菌体Phage_Pae01的潜伏期为30min，裂解期为20～30min，随后进入平稳期。
噬菌体Phage_Pae01的杀菌曲线绘制
取150μL过夜培养宿主菌液加入15mL LB液体培养基中，培养至对数生长期，OD600为0.50。取无菌96孔板，在孔中加入140μL LB液体培养基及30μL对数期宿主菌液，按不同的MOI(10，1，0.1，0.01，0.001，0.0001)做好标记，分别加入109-104滴度的噬菌体悬液30μL，对照组使用LB液体培养基代替噬菌体，每个孔设置3个复孔，设置温度37℃，每间隔30min测一次OD600，共测18h。与不加噬菌体的对照组相比，在不同的MOI条件下，细菌的生长逐渐被抑制并被杀灭，体现噬菌体Phage_Pae01的杀菌效果较强。
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