生物表面活性剂是一类由微生物代谢产生的两性化合物,具有化学合成表面活性剂所无法比拟的环境兼容性和广阔的应用前景。由于生物表面活性剂可生物降解、对有机体无毒害,因此在医药、洗涤剂、原油开采和食品工业以及植物病原菌生物防治方面具有潜在的应用价值。假单胞杆菌BS1是从大庆石油污染土样中分离的一株可以产生生物表面活性剂的菌株,同时发现假单胞杆菌BS1的菌体、去菌体发酵滤液对植物病原菌有一定的抑制作用,这表明了假单胞杆菌BS1具有一定的生防潜力。由此可见,假单胞杆菌BS1具有很好的工业开发前景和应用价值。将对假单胞杆菌BS1培养条件进行优化,为以后开发利用假单胞杆菌BS1提供了更加可靠的理论依据。
1材料与方法
1.1供试菌株
假单胞杆菌BS1,由黑龙江八一农垦大学农学院植物病理与应用微生物所提供。
1.2供试培养基
无机盐培养基:硝酸钠1.5 g,硫酸铵1.5 g,磷酸氢二钾1.31 g,硫酸镁0.5 g,氯化钾0.5 g,硫酸亚铁0.01 g,氯化钙0.002 g,蒸馏水1 000 mL,pH 7.0。
发酵培养基:硝酸钠1.5 g,硫酸铵1.5 g,磷酸氢二钾1.0 g,硫酸镁0.5 g,氯化钾0.5 g,硫酸亚铁0.01 g,氯化钙0.002 g,蒸馏水1 000 mL,液体石蜡5%,pH 7.0。
固体LB培养基:胰化蛋白胨10 g,酵母提取物5 g,氯化钠10 g,琼脂15 g,定容至1 000 mL。以上培养基均经过121℃高压蒸汽灭菌20 min后,保存备用。
1.3碳源对假单胞杆菌BS1生长的影响
将供试假单胞杆菌BS1在固体LB培养基上活化24 h后,用无菌水配制成菌悬液(107cfu·mL-1)。向100 mL的无机盐培养基中分别加入5 mL的液体石蜡、正己烷、正辛烷、正庚烷作为碳源,每处理重复3次,灭菌后,按1%的比例分别接种菌悬液,置于37℃、180 r·min-1振荡培养箱中培养9 d,每隔24 h取一次样,通过紫外分光光度计测定各处理菌悬液的光吸收值(OD640)。
1.4接种量对假单胞杆菌BS1生长的影响
在100 mL灭菌后的发酵培养基中分别以1%、2%、3%、5%、7.5%、10%的比例接种菌悬液,每处理3次重复,置于37℃、180 r·min-1振荡培养箱中培养9 d,每隔24 h取一次样,通过紫外分光光度计测定各处理菌悬液的光吸收值(OD640),每处理重复3次。
1.5温度对假单胞杆菌BS1生长的影响
将菌悬液按3%比例的接种量接种于灭菌后的发酵培养基中,然后分别置于25、30、35、37、40℃,180 r·min-1的振荡培养箱中培养9 d,每隔24 h取一次样,每处理重复3次,通过紫外分光光度计测定各处理菌悬液的光吸收值(OD640)。
1.6 pH对假单胞杆菌BS1生长的影响
用0.1 mol·L-1的HCl或NaOH将发酵培养基的pH值分别调至5.0、6.0、7.0、8.0和9.0,每处理3次重复,灭菌后按3%比例的接种量接入菌悬液,置于30℃、180 r·min-1振荡培养箱中培养9 d,每隔24 h取样一次,通过紫外分光光度计测定各处理菌悬液的光吸收值(OD640),每处理重复3次。
1.7 NaCl浓度对假单胞杆菌BS1生长的影响
在发酵培养基其他成分不变的情况下,分别以0%、1%、3%、5%、10%、15%的比例添加NaCl,每处理3次重复,然后按3%比例的接种量接入菌悬液,置于30℃、180 r·min-1振荡培养箱中培养9 d,每隔24 h取一次样,通过紫外分光光度计测定各处理菌悬液的光吸收值(OD640),每处理重复3次。
1.8装液量对假单胞杆菌BS1生长的影响
将250 mL的三角瓶中分别装入70、100、130、160、190 mL的发酵培养基,每处理3次重复,灭菌后,按3%比例的接种量接入菌悬液,置于30℃、180 r·min-1振荡培养箱中培养9 d,每隔24 h取一次样,通过紫外分光光度计测定各处理菌悬液的光吸收值(OD640),每处理重复3次。
1.9最适培养条件下假单胞杆菌BS1生长曲线的测定
将发酵培养基按130 mL的装液量装入三角瓶中(250 mL的三角瓶),灭菌后以3%比例的接种量接入菌悬液,置于30℃、180 r·min-1振荡培养箱中培养,每处理重复3次,定时取样,通过紫外分光光度计测定各处理菌悬液的光吸收值(OD640)。
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