1材料与方法
1.1试验动物及其神经类型分组
本试验依据现有工作犬神经类型的行为学研究，并根据在实战中执行任务的特征需求制定工作犬神经类型评估标准(表1)。依据此标准，从公安部沈阳警犬基地90头警用马里努阿犬中选取14头典型的安静型与活泼型犬(体重为25.62kg±2.23kg)，每种类型7头(公犬4头，母犬3头)，所有试验犬健康、年龄相近(12月龄)。
表1工作犬神经类型评估标准
1.2试验设计及饲粮
采用配对试验设计，将14头马里努阿犬按照配对要求(性别相同、体重接近)配成7对。试验饲粮为普瑞纳饲料有限公司生产的全价配合饲粮(粗蛋白质含量为27%)，其营养标准满足NRC(2006)犬营养需要量。试验周期为30d，其中1~7d为环境适应期，8~30d为正式试验期。
1.3饲养管理及样品采集
所有试验犬均按照警用工作犬饲养管理规范进行统一的饲养管理，采用单笼饲养，并在试验开始前对试验犬按标准程序进行防疫并驱虫。每日08:30及16:30分2次饲喂(600g/d)，期间自由饮水。每次进食结束40min后进行自由活动，每次自由活动时间不少于60min。试验期间定期对试验场所进行冲洗、消毒。试验第30天，分别收集试验犬2次饲喂后首次排出的新鲜粪便10g，每头试验犬的两个粪便样品混合均匀后置于EP管中，于-80℃待测。
1.4指标测定与方法
采用QiagenDNA提取试剂盒提取试验犬粪便总DNA，提取步骤严格按照试剂盒说明书进行。对提取的总DNA进行纯化、检测浓度和纯度。以提取的粪便总DNA为模板，对细菌V3~V4区进行PCR扩增，所用上游引物为341F(5'-CCTACGGGNGGCWGCAG-3')，下游引物为805R(5'-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3')。PCR扩增体系20μL:5×FastPfuBuffer4μL，2.5mmol/LdNTPs2μL，5μmol/L上、下游引物各1.0μL，FastPfuPolymerase0.4μL，DNA模板10ng，补ddH2O至20μL。PCR反应条件:95℃预变性3min;95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸45s，共27个循环;72℃延伸10min，4℃保存。PCR产物经2.0%琼脂糖凝胶电泳检测、切胶回收后，进行高通量测序。对测得的序列，使用USEARCH(11.0.667)在相似阈值大于97%的情况下将符合条件的序列分配到相同操作分类单元(OTU);基于QIIME2软件，使用SILVA数据库(138.1)对OTU进行分类物种注释;使用Mothur(1.45.3)对各样本物种进行Alpha多样性分析;采用主坐标分析方法(PCoA)对各样本物种复杂性进行Beta多样性分析;使用R(4.4.0)中microeco包(1.8.0)进行LEfSe分析，设置LDA阈值为2.5(lg);使用R(4.4.0)中psych包(2.4.6)进行相关性分析。
1.5数据统计分析
试验数据采用SAS9.4的MEANS模块对基本统计量进行分析，采用Paired-SampleT Test对不同处理犬的粪便微生物指标和血液生化指标进行差异性分析;基于SPARCC方法统计14头犬粪便菌群之间的相关性(分别在门水平和属水平上统计)，P小于0.05为差异显著;P小于0.01为差异极显著。
使用GraphPadPrism8.0软件作图。
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