1.4噬菌体宿主范围
利用实验室从明永冰川地区分离、鉴定的菌株进行噬菌体宿主范围评估，包括Flavobacteriumsp.M YBO1，Pseudomonos sp.M YB05，Paenibaeillussp.MYB09，Chromobacterium sp.MYB10，Pseudom-onossp.MYB15等37株低温菌。将MYSP03、MYSP08和MYTP08纯培养液经0.22 m微孔滤膜过滤后，取100分别与300处于对数期的上述菌悬液混匀，15℃吸附10min后倒双层平板，于15℃恒温培养24～48h，观察出斑情况。同时以不加宿主菌的噬菌体纯培养液和不加噬菌体的宿主菌悬液作阴性对照，实验重复3次。
1.5噬菌体电镜形态观察
参考《分子克隆实验指南》第三版，取噬菌体纯培养液2L，加入PEG8000至终浓度为10％(w，v)，4℃静置过夜处理后10000r／min离心收集沉淀，经SM缓冲液重悬后利用氯化铯平衡密度梯度离心纯化噬菌体颗粒。磷钨酸染色后用透射电子显微镜H一7650观察。
1.6物理及化学因素对噬菌体活性影响
1.6.1温度对噬菌体增殖活性的影响取效价
为1xl0。pfu／mL的噬菌体纯培养液100 txL与处于对数生长期的宿主菌悬液按照MOI=10混匀，15℃温育吸附10min后补充体积至6mL，分别于4、l0、15、18、20、25o振荡培养6h，通过双层平板法测定培养液中的噬菌体效价。同时以不加噬菌体的宿主菌和不加宿主菌的噬菌体作对照，实验重复3次取平均值。
1.6.2噬菌体的热稳定性研究
取效价为1xl0 pfu／mL的噬菌体纯培养液100分别于40、5O、6O、70℃温育处理30rain，测定不同温度下样品中的噬菌体效价。实验重复3次取平均值。
1.6.3 pH对噬茵体活性的影响
取效价为1xl0’pfu／mL的噬菌体纯培养液100 L加入1mL不同pH的缓冲液中(pH 3～11)，室温下处理1h后测定不同缓冲液中的噬菌体效价。实验重复3次取平均值。
1.6.4化学试剂敏感性研究
取效价为lxl09pfu／mL的噬菌体纯培养液1mL分别经氯仿(25％wt／v，室温处理10min)、SDS(0.1％wth，50℃处理6min)、Triton)(-100(0.3％wt／v，室温处理10min)和蛋白酶K(1mg／mL，56℃处理1h)处理，测定不同样品中的噬菌体效价。
1.7吸附速率的测定
将效价为lxl0 pfu／mL噬菌体纯培养液与对数生长期的宿主菌悬液按照MOI=10混匀，15qC温育吸附，同时从0时刻开始在2、4、6、8、10、15、20、30min取样100IxL，13000r／min离心5min，测定上清液中噬菌体效价，同时以不加噬菌体的宿主菌和不加宿主菌的噬菌体作对照。以培养时间为横坐标，噬菌体效价为纵坐标，绘制吸附速率曲线。
1.8最佳感染复数的测定
参照Lu等的方法，略有改动。将处于对数生长期的宿主菌与噬菌体纯培养液稀释为lx10。cfu／mL和1xl0 pfu／mL，按照MOI为O.001、0.01、0.1、1、10和100加人噬菌体纯培养液和宿主菌，补充PYGV液体培养基平衡各管体积。l5℃、160dmin振荡培养3.5h后离心，双层平板法测定上清液中噬菌体效价，实验作双份复管培养取平均值。同时以不加噬菌体的宿主菌和不加宿主菌的噬菌体作对照，测得子代噬菌体效价最高者所对应的MOI即为最佳感染复数。
1.9一步生长曲线的绘制
将处于对数生长期的宿主菌稀释为1xl0cfu／mL，加入噬菌体纯培养液使得MOI=10。15℃吸附15min，经13000r／min离心5min，弃上清，用15℃温育的PYGV新鲜液体培养基洗涤两次，加入5mL新鲜液体培养基重悬沉淀后迅速置于15℃摇床中160r／min振荡培养，同时开始计时，自0时刻开始，每隔10min取样50，利用双层平板法测定噬菌体效价。各点均作双份复管取平均值，同时以不加宿主菌的噬菌体和不加噬菌体的宿主菌作对照。以培养时间为横坐标，测得培养体系中噬菌体的效价为纵坐标，绘制一步生长曲线。