2结果
2.1阴沟肠杆菌2025菌落形态
三区画线菌落形态如图1所示，LB培养基菌落(左)形态光滑湿润，呈圆形灰白色;APW培养基(右)形态光滑湿润、呈灰白色、生长状况较LB培养基更为旺盛。
图1阴沟肠杆菌2025菌落形态
2.2阴沟肠杆菌2025 16S rRNA系统发育树
将分离菌株16S rRNA测序序列与NCBI网站BLAST在线软件进行比对，结果显示，分离菌株与阴沟肠杆菌strain RCB 980的16S rRNA序列相似度高达98.88%。通过系统发育树可以看出，分离菌株菌种为阴沟肠杆菌，并将其命名为阴沟肠杆菌2025(图2)。
图2阴沟肠杆菌2025 16S rRNA系统发育树
2.3阴沟肠杆菌2025药物敏感性试验
34种抗生素比对结果显示(表1)，阴沟肠杆菌2025对16种抗生素产生耐药性，包括青霉素G、红霉素及万古霉素等;对亚胺培南、卡那霉素及四环素等7种抗生素耐药性为中介;对其余11种抗生素表现出高敏感性，包括庆大霉素、诺氟沙星及环丙沙星等。
表1阴沟肠杆菌2025 34种抗生素药物敏感性试验结果
抗菌药物抑菌圈直径折点/mm抑菌圈直径/mm敏感性
耐药(R)中介(I)敏感(S)
青霉素G≤28-≥29 0 R
苯唑西林≤10 11~12≥13 0 R
氨苄西林≤11 12~14≥15 0 R
羧苄西林≤19 20~22≥23 22 I
哌拉西林≤17 18~20≥21 27 S
头孢氨苄≤14 15~17≥18 11 R
头孢唑啉≤14 15~17≥18 0 R
头孢拉定≤14 15~17≥18 12 R
头孢呋辛≤16 17~19≥20 18 I
头孢他啶≤14 15~17≥18 23 S
头孢曲松≤13 14~20≥21 29 S
头孢哌酮≤15 16~20≥21 18 I
亚胺培南≤13 14~15≥16 14 I
痢特灵≤14 15~16≥17 13 R
阿奇霉素≤13 14~17≥18 11 R
麦迪霉素≤13 14~17≥18 0 R
红霉素≤13 14~22≥23 0 R
庆大霉素≤12 13~14≥15 15 S
新霉素≤12 13~16≥17 15 I
卡那霉素≤13 14~17≥18 15 I
丁胺卡那≤14 15~16≥17 14 R
左氧氟沙星≤13 14~16≥17 27 S
诺氟沙星≤12 13~16≥17 20 S
环丙沙星≤15 16~20≥21 30 S
复方新诺明≤10 11~16≥17 0 R
万古霉素≤14 15~16≥17 0 R
多黏菌素B≤8 9~11≥12 15 S
四环素≤14 15~18≥19 17 I
多西环素≤12 13~15≥16 16 S
米诺环素≤14 15~18≥19 12 R
氯霉素≤12 13~17≥18 23 S
克林霉素≤14 15~20≥21 0 R
链霉素≤11 12~14≥15 11 R
氟苯尼考≤12 13-17≥18 27 S
2.4噬菌体ZX14形态表征
噬菌体ZX14噬菌斑直径约1 mm，外无晕圈(图3A)。透射电子显微镜下观察，噬菌体ZX14有二十面体的头部和可收缩的尾部，头部长度约100 nm，头部直径约75 nm，尾部长度约100 nm，尾部直径约20 nm(图3B)。
图3噬菌体ZX14噬菌斑形态及透射电子显微镜观察
2.5噬菌体ZX14生物学特性测定
最佳MOI的测定可以反映噬菌体裂解速率。如图4A所示，当MOI=1时，噬菌体ZX14效价最高，达到2.5×109 PFU/mL。一步生长曲线是噬菌体裂解周期的最佳体现。通过一步生长曲线来确定噬菌体ZX14的潜伏期和裂解期。如图4B所示，噬菌体ZX14在0~20 min效价无明显变化，表明其潜伏期为20 min，20~80 min效价开始明显上升，表明其裂解期为60 min。经计算可得裂解量为45 PFU/cell。
图4噬菌体ZX14一步生长曲线(A)与最佳MOI(B)测定
2.6噬菌体ZX14稳定性鉴定
热稳定性测试显示(图5A)，噬菌体在37~50℃环境下活性稳定。在60℃下孵育20 min、40 min和60 min后，噬菌体滴度分别由5×108 PFU/mL降至2×107 PFU/mL，2.4×106 PFU/mL和3.5×106 PFU/mL。在70℃下孵育20 min后，噬菌体活性完全丧失。
图5噬菌体ZX14稳定性曲线
如图5B所示，噬菌体ZX14在pH 5~12缓冲液中处理1 h能保持活性稳定，效价均≥5×108 PFU/mL。pH 7时效价最高，为1.5×1010 PFU/mL，在pH 12时，效价降低为5×108 PFU/mL，pH 5时，效价降低为8×108 PFU/mL，在pH≤3和pH≥13时完全失活。
ZX14在氯仿体积比为0.2%、0.5%、1%、2%、3%、4%时效价仅在1×1010 PFU/mL与1×1011 PFU/mL之间轻微波动，表明噬菌体ZX14有着良好的氯仿耐受性(图5C)。
相关新闻推荐
3、十二酸单甘油酯对PEDV感染3D4/21巨噬细胞活性、基因表达的影响（四）