1.2.4生理生化试验
对分离得到的乳酸菌进行生理生化特性鉴定，具体步骤参照《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》。将菌株接种培养24 h后，进行吲哚试验、过氧化氢酶试验、V-P试验、糖发酵试验等。
1.2.5温度试验
于MRS液体培养基中培养菌株24 h后，以2.0%的接种量进行传代，分别于20、25、30、37、40和45℃恒温厌氧箱内培养，取其在培养0、1、2、3、4、5、6、8、10、12、14、24、36、48 h时的菌悬液测定600 nm处吸光度(OD600)值，每组设置3个平行。最终结果以每组平均值为标准绘制统计图。
1.2.6产酸、耐酸性能试验
将培养24 h的菌悬液以2.0%的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃恒温厌氧培养。分别于0、2、4、6、8、10、12、14、24 h利用pH计测定培养液pH，根据测定结果绘制产酸速率曲线。
将培养24 h的菌悬液以2.0%的接种量分别接种于不同初始pH(1、2、3、4、5、6、7)的MRS液体培养基中，37℃恒温厌氧培养，取其在培养0、3、6、12 h时的菌悬液测定OD600值，每组设置3个平行。最终结果以每组平均值为标准绘制统计图。
1.2.7人工胃液和人工肠液耐受性试验
取培养24 h的菌悬液1 mL离心弃上清并加入生理盐水重悬，向重悬后的菌悬液中分别加入1 mL经滤膜过滤除菌的人工胃液和人工肠液，37℃恒温厌氧培养，取其在培养0和3 h时的菌悬液各100μL，对其梯度稀释后涂布，用平板菌落计数法计算活菌数，以0 h为对照，计算存活率，测定菌株在胃液中的耐受性。人工胃液和人工肠液配制方法参照2020版《中华人民共和国药典》。存活率计算公式如下:
存活率(%)=100×lgNt/lgN0。
式中:N0为0 h活菌数;Nt为3.0 h活菌数。
1.2.8胆盐耐受性试验
将培养24 h的菌悬液以2.0%的接种量接种于胆盐浓度分别为0、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%的MRS液体培养基中，37℃恒温厌氧培养，取其在培养0、3、6 h时的菌悬液测定OD600值，每组设置3个平行。最终结果以平均值为标准绘制统计图。
1.2.9抑菌试验
将培养24 h的菌悬液离心取上清液备用，活化大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌并制备菌悬液，分别取200μL均匀涂布于LB平板上，上清液通过牛津杯琼脂扩散法进行抑菌试验，测定抑菌圈。大于牛津杯直径(8 mm)1 mm的抑菌圈直径视为具有抑菌性，小于等于1 mm的抑菌圈直径视为无抑菌性。
1.2.10耐药性试验
取培养24 h的菌悬液200μL均匀涂布于MRS平板上，室温放置3~5 min，利用纸片扩散法将抗菌药物纸片贴于已接种细菌的琼脂表面，测定菌株对青霉素G、氯霉素、头孢孟多、克林霉素、环丙沙星、四环素、庆大霉素、万古霉素、磷霉素、阿奇霉素、甲氧苄啶和甲硝唑12种抗生素的耐药性。大于药敏片直径(6 mm)1 mm的抑菌圈直径视为具有抑菌性，小于等于1 mm的抑菌圈直径视为无抑菌性。
1.2.11动物安全性试验
将20只体重(22±2)g的昆明系雌性小鼠随机分为2组，每组10只。将菌液浓度调整为1×109 CFU/mL备用，试验组小鼠每只一次性腹腔注射0.3 mL菌液，对照组小鼠腹腔注射等量的生理盐水，留察7 d，记录各组小鼠每日的体重变化、死亡情况，7 d后对每组小鼠进行剖检，对比2组间小鼠内脏器官变化。
1.3数据分析
数据通过SPSS 26.0软件中t检验进行分析，结果以“平均值±标准差”表示，采用Graph Pad Prism 8.0.1软件作图，P<0.05为差异显著。
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