本研究通过初筛、复筛从青岛近海沉积物中分离出一株具有琼胶酶活性的菌株，该菌的最佳发酵时间为26 h，对该菌培养基进行卢戈氏碘液染色后菌落周围出现明显透明圈，镜检观察菌株的革兰氏染色结果表明，该菌为革兰氏阴性菌。经过鉴定，该菌株为不动杆菌(Acinetobactersp.)，命名为Acinetobactersp.LXK，对该菌的粗酶学特性进行初步研究，结果显示，该酶的最适反应温度为40℃，最适底物浓度为0.5%，最适反应体系pH为8.0，K+和Ca2+对酶解反应有促进作用，Fe2+、Mn2+和Ba2+对酶解反应有不同程度的抑制作用。
海洋多糖工业的兴起使得海洋多糖及其降解酶受到了广泛的重视。现如今，备受瞩目的琼胶寡糖有着分子量小、水溶性好、易吸收等特点，使其抗病消炎、抗淀粉老化、保湿美白等功效的应用价值大幅提升，已经广泛应用在食品、化妆品和医疗等领域。但是，利用琼胶酶降解琼胶规模性生产琼胶寡糖在世界范围内是个研究的难点，原因就在于缺少工程菌和琼胶酶产生菌的产酶活力低等问题。我国虽然是一个海洋大国，海洋资源雄厚，但生产的多为初级产品，在琼胶及琼寡糖的研发与应用领域尚处于起步阶段。琼胶，也叫琼脂，是从石花菜、江蓠等红藻植物中提取出一类藻胶，由琼脂糖(agarose)和琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由1，3连结的β-D-半乳糖和1，4连结的3，6-内醚-L-半乳糖交替连接起来的长链分子;琼脂胶由包含硫酸基、甲基等多种取代基的复杂单糖残基多糖链构成。目前，降解琼胶生产琼寡糖较常用的方法有两种，一个是化学法，另一个是酶解法。化学降解法存在反应条件难以控制、产品分析和产物回收难等弊端。酶解法降解琼胶因特异性强、反应条件温和、降解过程简单易控等优点使其成为生产琼寡糖的主要手段。
从19世纪50年代开始，人们陆续分离出多种琼胶降解菌，包括芽孢杆菌属（Bacillus sp.）、盐杆菌属（Salegentibacter sp.）、假单孢菌属（Pseudomonas sp.）、寡养单胞菌属（Stenotrophomonas sp.）、噬琼胶菌属（Agarivorans sp.）、短杆菌属（Brevibacterium sp.）、弧菌属（Vibrio sp.）、黄杆菌属（Flavobacterium sp.）、假交替单孢菌属（Alteromonas sp.）和不动杆菌属（Acinetobacter sp.）等。海洋是琼胶酶产生菌生存的大环境，较容易分离出琼胶降解菌。例如，刘丽莉和蔡俊鹏等人分别在海藻中分离出产琼胶酶菌株Vibrio agarivorans ZGR-26和Aeromonas trota JK333；郭彦岑等人在海洋沉积物中分离出产琼胶酶菌株Vibrio sp.FG2；马悦欣等人在仿刺参消化道内分离出产琼胶酶菌株Pseudoalteromonas sp.HF3-04；杜宗军和褚艳等人分别在海水中分离出产琼胶酶菌株Alteromonas addita QM65和Pseudomonas sp.CY-24。但是，由于琼胶酶活性低等问题，目前还没有工业化的菌株。进一步寻找产琼胶酶的菌株是酶法制备琼寡糖的迫切需要。本研究从青岛近海沉积物中分离具有琼胶酶活性的菌株，对其进行鉴定和粗酶学特性的初步研究，以期获得适合工业应用的琼胶酶。
1材料与方法
1.1材料与仪器
琼脂粉、酵母粉、蛋白胨北京双旋微生物培养基制品厂；NaCl、MgSO4、KCl天津市致远化学试剂有限公司；CaCl2、K2HPO4、乙醇天津市巴斯夫化工有限公司；FeSO4莱阳市康德化工有限公司；沙皇染液、结晶紫染液北京陆桥技术有限责任公司。
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