能够分解果胶质的酶称作果胶酶（pectinase）.该酶可分为：原果胶酶、裂解酶（PL）、多聚半乳糖醛酸酶（PG）和果胶酯酶（PE）.相应地，测量酶活性的方法也有很多，如滴定法、黏度下降法、脱胶作用时间法、还原糖测定法、紫外吸收测定法等。本实验酶活性测定均采用还原糖测定法中的3,5-二硝基水杨酸（DNS）法.
果胶酶主要应用于食品加工业，在纺织、环境保护、饲料加工、生物制浆、木材防腐等行业中也有广泛的应用，草酸青霉（Penicillium oxalicum）果胶酶的诱导抗病作用。
果胶酶主要由微生物和植物合成。微生物中的真菌、放线菌和细菌都能产生果胶酶的相关酶系。目前国内外研究与应用较多的是细菌和霉菌，其中黑曲霉（Asperillus niger）是国际公认的安全菌株，所以最受关注.此外，酵母菌、链霉菌和根霉等也有相关的报道，而关于草酸青霉（Penicillium oxalicum）的相关报道甚少，草酸青霉（Penicillium oxalicum）产果胶酶的液体发酵更是鲜有报道。
果胶酶的传统工业化生产主要采用固体发酵法，但液体发酵法具有发酵条件参数易于测量、再现性强、易于控制等优点。本实验从污泥中筛选到一株高产果胶酶的草酸青霉，运用液体发酵法对其酶活性进行了相关研究。
1材料和方法
1.1菌株来源
以从山东、四川、海南、浙江等地采集的土壤、昆虫、动物内脏、腐烂水果等100多份样品为材料，分离筛选获得高产果胶酶菌株。
1.2培养基
1）马铃薯葡萄糖培养基（PDA）：马铃薯200 g,葡萄糖20 g,琼脂15——20 g,水1000 mL,pH 6.0.
2）产果胶酶筛选培养基：果胶30 g,NaNO33 g,K2HPO4·3H2O 3.3 g,KCl 0.5 g,Fe2（SO4）30.01 g,（NH4）2SO420 g,MgSO40.24 g,CaCl20.15 g,KH2PO43.8 g,琼脂粉20 g,溴酚蓝0.2 g,水1000 mL,pH 6.0.
3）摇瓶种子培养基：果胶4 g,（NH4）2SO41 g,KH2PO43.8 g,K2HPO4·3H2O 0.2 g,水100 mL,pH 6.0.
4）摇瓶基础培养基：桔皮粉4 g,米糠4 g,（NH4）2SO41 g,KH2PO43.8 g,K2HPO4·3H2O 0.2 g,水100 mL,pH 6.0.
1.3初筛
取适量土样、昆虫、腐烂果实等磨碎后加无菌水，于28℃培养24 h,然后取0.1 mL培养液进行涂布，培养3 d.产果胶酶的菌落着生的蓝色培养基有黄色水解圈生成，挑取水解圈明显的菌落进行复筛【10].
1.4复筛
在筛选培养基中挑取水解圈大的单菌落，通过测定和计算其变色圈直径和菌落生长圈直径的比值（Dp/Dc）进行复筛。在培养皿的中心分别接入初筛获得的菌种，接种后培养皿置28℃恒温培养箱中培养3 d.测量各菌落生长圈的直径Dc和变色圈的直径Dp,选择Dp/Dc值较大的菌种备用，最终选取一株果胶酶活性高的菌株进行实验。
1.5摇瓶培养
将复筛获得的菌种经PDA斜面培养后，用无菌水配成1.0×106的孢子悬浮液，取2 mL（摇瓶装液量的5%）接入种子摇瓶培养基中，回转式摇床转速为160 r/min,28℃培养24 h后，取3.2 mL（摇瓶装液量的8%）种子液接入摇瓶培养基中继续培养70 h.摇瓶装液量均为250 mL三角瓶中装40 mL.
1.6粗酶液的提取
发酵液在4℃，10000 r/min离心10 min,取上清液作为粗酶液。
1.7酶活性测定
采用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法【3]测定酶活性。吸取0.2 mL适当稀释的酶液于试管中，加1.8 mL 0.4%的果胶底物溶液，50℃水浴反应30 min后，加2 mL DNS试剂终止反应，沸水浴10 min,冷却后蒸馏水定容到15 mL,摇匀。空白对照：吸取0.2 mL煮沸的稀释酶液于试管中，加2 mL DNS试剂和1.8 mL 0.4%的果胶底物溶液，50℃水浴反应30 min,沸水浴10 min,冷却后蒸馏水定容到15 mL,摇匀。在540 nm波长处测定吸光度。在上述反应体系中，以每毫升果胶酶液降解果胶底物1 min产生1μg还原糖定义为1个酶活性单位。
1.8培养时间对产果胶酶的影响
取3.2 mL（摇瓶装液量的8%）种子液接入40个250 mL装液量为40 mL的三角瓶内，160 r/min,28℃摇瓶培养，每隔2 h取样。接着，将菌体一并用滤纸过滤，然后用烘箱于50℃烘至恒重，再用分析天平称菌丝体干质量。实验重复3次。
1.9菌种鉴定
1.9.1培养和形态特征观察
将菌株在PDA培养基平板上培养3 d,用显微镜观察其菌丝、分生孢子梗、分生孢子等特征。
1.9.2 DNA提取与ITS序列分析
取PDA培养基平板上培养3 d的新鲜菌丝体50 mg,加液氮研磨成粉末，用试剂盒提取DNA.利用真菌通用引物ITS1:5‘-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’和ITS4:5‘-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’进行rDNA的内转录间隔区（ITS）序列扩增，测序由上海生物工程有限公司完成。将测得的ITS序列在GenBank数据库进行BLAST比对，通过同源性分析对菌株进行分子水平的鉴定。
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