樱桃有较早的成熟期,素来有“春果第一枝”的美誉,食用价值高、经济效益好。但在樱桃树生长过程中经常会遭到一些病虫害的影响,其中樱桃流胶病就是樱桃种植中常见的病害之一。樱桃流胶病会危害枝干,造成主干、主枝甚至枝条流胶,导致树势衰弱,树体抵抗力降低,果实产量和品质下降,严重时大枝枯死,甚至整株死亡。意大利、智利等地均有发生。随着樱桃栽培面积的扩大,流胶病的发生也不断呈上升趋势,探明樱桃流胶病的病因以及寻求流胶病的防治方法对促进樱桃产业的发展具有十分重要的意义。
目前国内外对樱桃流胶病的研究多侧重于研究流胶的规律和其他相似核果类的致病菌。Bush、Copes、罗春香和Saniewski等多侧重于研究流胶的爆发期及外部因素的影响。吴文能等、Koh等、Tang等和吴小芹等等发现Botryosphaeriadothidea是猕猴桃采后果实腐烂病、苹果轮纹病及一些经济林、用材林、绿化林木和较为珍稀树种溃疡的主要致病菌。但并未对造成甜樱桃流胶的主要致病菌及侵染机理进行详细的研究。Griffin等是最早研究樱桃流胶病的,但并未分离到引起樱桃流胶的关键致病菌。张福兴等证实了甜樱桃溃疡型流胶病的致病菌属为Botryosphaeria,但仅对此致病菌属的致病性进行了简单描述,并未对其生物学特性进行系统化研究。因此,本实验在已成功分离纯化并通过回接验证一株能引起甜樱桃流胶的病原菌SXYTLJ01的基础上,对该菌株的生物学特性进行了更深入的探索。
本实验以在山西榆次樱桃园中甜樱桃流胶病枝上分离得到的病原菌SXYTLJ01为对象,通过观察其菌丝结构,不同胁迫条件下能否诱导产孢,其最适生长条件和致死温度等方面,对该菌株的生物学特性进行了研究,以期为该菌种建档提供有用信息,为明确病害的发病机理及防治提供试验基础与理论依据。
1材料与方法
1.1材料与仪器
病原菌SXYTLJ01菌株从山西榆次樱桃园的流胶枝条上分离纯化得到;菌株保存在4℃的冰箱中,备用,在试验前转接马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基配方:马铃薯20%,葡萄糖2%,硫酸镁0.2%,无水磷酸二氢钾0.2%,蛋白胨0.3%,琼脂2%),28℃暗培养,活化得到试验用菌落。琼脂北京索莱宝科技有限公司;葡萄糖、可溶性淀粉、麦芽糖、乳糖、蔗糖天津市风船化学试剂科技有限公司;蛋白胨、牛肉膏、硫酸铵、硝酸钠、硝酸钾北京奥博星生物技术有限责任公司;硫酸镁天津市北辰方正试剂厂;无水磷酸二氢钾北京精求化工厂;乳酸石炭酚棉兰染色液北京索莱宝科技有限公司;Ezup柱式SK8259真菌基因组DNA抽提试剂盒、Taq Plus DNA聚合酶、10X PCR Buffer(含Mg2+)、dNTP(10 mmol/L)、灭菌去离子水、6×DNA Loading Dye、DNA Ladder Mix(100～10000 bp)、DNA Ladder Mix(100～3000 bp)、50×TAE、琼脂糖H、SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒、异丙醇、1×TE生工生物工程(上海)股份有限公司;无水乙醇天津欧博凯化工有限公司。
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