实验原理
我们知道微生物都具有生长旺、繁殖快的特点，单细胞微生物如**、酵母菌的个体细胞的增大即细胞物质的增加是有限度的，细胞长大到一定程度就开始分裂繁殖，菌体数量增多。**旺盛生长时几十分钟就可繁殖一代。
因此他们的生长往往是通过繁殖表现出来的，本质上是以群体细胞数目增加为生长标志。丝状微生物如放线菌、霉菌的生长主要表现为菌丝的伸长和分枝，他们相互缠绕，很难分清个体与个体之间的界限，所以通常以菌丝的重量增长(细胞质量的增加)或菌丝生长速度间接来衡量生长状况。目前测定微生物数量的方法有直接法和间接法。直接法包括血球计数板法、涂片染色法、比浊法等；间接法又包括平皿菌落计数法、液体稀释法、薄膜过滤计数法等。测定细胞物质量的方法有定氮法测、DNA法、测定细胞干重法、测定细胞湿重法、生理指标测定法等。
为了学习微生物的生长规律，增进了解微生物生长旺、繁殖快的特点，以酵母、放线菌和黄瓜枯萎病菌作为实验材料，本实验采用了干/湿重法、血球计数法直接计数、比浊法以及菌丝长度测量法,测定了放线菌及黄瓜枯萎病菌的生长量和黄瓜枯萎病菌的生长曲线，绘制了酵母生长标准曲线（细胞数密度-OD420）。
实验试剂
培养基：牛肉膏蛋白胨液体培养基(肉汤培养液)高氏一号培养基(液/固)马铃薯蔗糖培养基(PDA液/固)
试剂：无菌水
实验设备
震荡器
血球计数板(0.10mm 1/400mm2 16×25)
电炉
恒温培养摇床
普通离心机
超净工作台
恒温培养箱
手提式高压蒸汽**锅
光学显微镜
721型分光光度计
比色皿
布氏漏斗
烘箱
打孔器
接种环
定性滤纸
直尺等
实验材料
菌种：放线菌酿酒酵母菌黄瓜枯萎病菌
实验步骤
1.放线菌生物量测定
（1）菌丝的生物量测定——干/湿重法
将从土壤中分离出的放线菌在高氏1号平板上密集划线后，培养一周。用打孔器打下数个菌块，分别取3片菌块放入3瓶50ml/250ml高氏1号液体培养基中，1片菌块放入50ml/250ml无菌水中，30℃200rpm摇瓶培养一周后用定性滤纸过滤，收集菌丝，测出湿重后，将菌丝置于80℃烘箱中烘干至恒重，再测出的菌丝重量即为干重。
2.黄瓜枯萎病菌生长量测定
(1)菌丝长度测量法
通过测定菌落生长的直径来估测黄瓜枯萎病菌的生长速率。
挑一小块带黄瓜枯萎病菌菌丝的培养基接种于PDA平板中央，培养一周后用直径0.8cm的无菌打孔器打下接种至直径9.0cmPDA平板的中央，在接下来的一周内每隔12hours测量一次菌丝的生长长度，直到菌丝掩盖全皿为止。求出菌丝的平均生长速率，并据此绘制出生长曲线。
(2)菌丝的生物量测定——干/湿重法
将培养一周的黄瓜枯萎病菌PDA平板用打孔器打下数个菌块，取3片菌块分别放入3瓶50ml/250ml PDA液体培养基中，1片菌块放入50ml/250ml无菌水中，30℃200rpm摇瓶培养一周后用定性滤纸过滤，收集菌丝，测出湿重后，将菌丝置于80℃烘箱中烘干至恒重，再测出的菌丝重量即为干重。
3.酵母生长量测定
(1)测定酵母细胞悬浮液的OD值——比浊法
将酵母接种至肉汤培养液(50ml/250ml)中，每瓶接一环，共2瓶，28℃125rpm摇瓶培养两周。将培养液分装入10ml离心管中5000r/min离心5～6min，弃去上清，再用无菌水重悬，离心并弃去上清，重复2次，以除去残留在培养液。
合并沉淀，用无菌水按一定比例稀释为6个稀释度，于420nm处测量OD值（721型分光光度计的有效测量范围为0.1-0.65）。
(2)测定酵母悬浮液的细胞浓度——血球计数板计数
洗净血球计数板后将盖玻片盖在计数室上，用细口滴管将其中一个稀释度的菌液来回吹吸数次，使菌液充分混匀后立即吸取少量菌液加在盖玻片的边缘上，让菌液由盖玻片与计数板的缝隙间渗入计数室(计数室内不能有气泡)。轻压盖玻片，以免因菌液过多而将盖玻片顶起而改变了计数室的容积。
静置片刻，待菌体自然沉降稳定后，先用低倍镜寻找计数室的位置(视野宜调暗些)，找到后将它移到视野中央，再换高倍镜观察和计数。计数完毕后，洗净计数板。每个稀释度计数一次。
计数原则：为了减少误差，常取4个角上的4个中方格和中央的1个中方格计数，*后取其平均值。另外：计上不计下，计左不计右，计数务必要有一定路径。
根据OD值与酵母细胞血球计数值绘制标准曲线图。
注意事项
微生物的生长繁殖是其内外各种环境因素相互作用下生理、代谢等状态的综合反映，因此，有关生长繁殖的数据就可以作为研究多种生理、生化和遗传等问题的重要指标；同时，微生物在生产实践上的各种应用或人类对致病、霉腐等有害微生物的防治，也都与它们的生长繁殖或抑制紧密相关。
本实验方法有其显著的优点，也有一些不足之处：
1.血球计数板是一种常用的微生物直接技术方法，具有直观快速、容易操作等优点，但费力，伤眼睛，且对菌悬液浓度要求高，一般不宜过低或过高(常大于10~6个/ｍ），OD值应在0.1-0.65之间，不易把握。而且此法不能测出活菌数，若选用台酚蓝等染色液,可使死细胞染为蓝色,活细胞不被染色，从而测出活菌数。
2.湿重法和干重法可以体现发酵液中生物质的多少,但不能反映菌丝生理状态,衰老程度,甚至不能区分细胞死活。
3．对辐射生长的丝状**进行菌丝生长速率法衡量其生长状况来的简捷、方便，但似乎应用性不强。
因此，每种方法都各有优点和局限性，只有在考虑了这些因素同需要着手解决的问题之间的关系以后，才能选择较优者，或者几种方法同时并用。
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