2、结果与分析


2.1金黄短杆菌CT-A16的生物学特性


2.1.1金黄短杆菌CT-A16的培养特征和形态特征

取供试金黄短杆菌CT-A16接种于NA平板培养基上,28℃培养3 d,观察到菌落颜色为白色,菌落边缘光滑平整,通过显微镜观察菌体呈短杆状。对菌体进行革兰氏染色、芽孢染色、荚膜染色,结果显示金黄短杆菌CT-A16为革兰氏染色为阳性,无芽孢,有荚膜。


2.1.2金黄短杆菌CT-A16最适温度的测定

由图1可知,金黄短杆菌CT-A16的OD值随着培养温度的逐步升高而升高,在培养温度为30℃时OD值最大。在30~40℃时,随着培养温度的增加,OD值呈下降趋势,因此金黄短杆菌CT-A16的最适生长温度为30℃。


2.2金黄短杆菌CT-A16最适pH值


由金黄短杆菌CT-A16最适pH值的测定结果(图2)表明:随着pH值的升高,金黄短杆菌CTA16菌液的OD值逐步升高,待pH值为6时达到最高值,随后OD值随pH值的增加呈下降趋势。即最佳生长pH值为6.0,适宜金黄短杆菌CT-A16生长的pH值范围为5.0~7.0。

图2不同pH值对金黄短杆菌CT-A16的影响


2.3金黄短杆菌CT-A16的生长曲线


金黄短杆菌CT-A16生长曲线(图3)的测定结果表明,由金黄短杆菌CT-A16不同时段内的OD值所反映出的生长曲线呈现出阶段性变化。第一阶段为迟滞期:生长16 h内,OD值呈现逐步增长的趋势,增长速度非常缓慢;第二阶段为对数生长期:生长16~36 h内,OD值呈现快速增长趋势,36 h时OD值达到峰值;随后进入稳定期:生长36~40 h(或40 h以后)内OD值不再增加并出现降低现象。综上所述,在测定时间内,内生金黄短杆菌CT-A16的生长阶段为:迟滞期细菌接种至培养基后,对新环境有一个短暂适应过程;对数生长期细菌快速繁殖增长,菌数显著增多,此时期活菌数直线上升,细菌以稳定的几何级数极快增长;第三阶段稳定期培养40 h时内生细菌基本上是处于稳定期的阶段,尚未进入衰退阶段。

图3金黄短杆菌CT-A16的生长曲线


2.4金黄短杆菌CT-A16发酵过滤液对病原菌菌丝生长的抑制效果


通过对病原菌菌丝生长情况进行观察,统计不同比例内生金黄短杆菌过滤液对不同病原菌的抑制率(表1),由表1可以看出,内生金黄短杆菌CTA16对病原菌的抑制效果较好,在菌液浓度为20%时,内生金黄短杆菌CT-A16对油疤病菌原菌的抑制效果最好。

表1不同浓度金黄短杆菌CT-A16过滤液对病原菌菌丝生长的抑制率


2.5金黄短杆菌CT-A16发酵灭菌液对病原菌菌丝生长的抑制效果


通过对病原菌菌丝生长情况进行观察,统计不同种不同比例内生金黄短杆菌灭菌液对病原菌的抑制率,结果如表2所示,浓度为20%的金黄短杆菌CT-A16灭菌液对油疤病菌的抑制效果最佳,其次是疣孢病菌、蛛网病菌。


2.6金黄短杆菌CT-A16发酵过滤液对病原菌孢子萌发的抑制效果


通过对病原菌孢子萌发生长情况进行观察,统计不同比例内生菌过滤液对不同病原菌的抑制率,结果见表3。内生金黄短杆菌CT-A16对于病原菌抑制效果最好的浓度为40%,对疣孢病菌、油疤病菌都能100%地抑制孢子的萌发,对蛛网病菌孢子萌发的抑制效果相对较弱。

表3不同浓度金黄短杆菌CT-A16过滤液对病原菌孢子萌发的抑制率


2.7金黄短杆菌CT-A16发酵灭菌液对病原菌孢子萌发的抑制效果


通过对病原菌孢子萌发生长情况进行观察,统计不同比例内生菌灭菌液对不同病原菌孢子萌发的抑制效果,结果见表4。浓度为40%的内生金黄短杆菌CT-A16发酵灭菌液对病原菌的抑制效果最佳,对疣孢病菌和油疤病菌的抑制效果较好。

表4不同浓度金黄短杆菌CT-A16灭菌液对病原菌孢子萌发的抑制率


2.8金黄短杆菌CT-A16挥发性物质对病原菌菌丝生长的抑制效果


通过观察病原菌与内生金黄短杆菌CT-A16对接密封的培养皿中病原菌的菌丝生长状况,结果表明:内生金黄短杆菌CT-A16挥发性物质对病原菌菌丝生长具有一定的抑制作用。从表5可以看出,内生金黄短杆菌CT-A16挥发性物质对于油疤病菌、蛛网病菌的抑制效果比较好,对于疣孢病菌的抑制效果相对较弱。

表5金黄短杆菌CT-A16挥发性物质对病原菌菌丝生长的影响


3结论与讨论


金黄短杆菌CT-A16的生物学特性测定结果表明,金黄短杆菌CT-A16菌落颜色为白色,菌落边缘光滑平整,通过显微镜观察菌体呈短杆状。对菌体进行革兰氏染色、芽孢染色、荚膜染色,结果显示:金黄短杆菌CT-A16为革兰氏染色为阳性,无芽孢,有荚膜。金黄短杆菌CT-A16进行最适温度为30℃,最适pH值为6.0。


由金黄短杆菌CT-A16对3种食用菌病原菌的生防效果可以看出,不同浓度金黄短杆菌CT-A16过滤液和灭菌液对病原菌菌丝生长均具有一定的抑制效果。其中浓度为20%的金黄短杆菌CTA16过滤液对病原菌的抑制效果较好,对疣孢病菌的抑制率达到66.53%,对油疤病菌的抑制率为62.73%,对蛛网病菌的抑制率为83.58%。在不同浓度金黄短杆菌CT-A16过滤液和灭菌液对病原菌孢子萌发的测定中发现,浓度为40%金黄短杆菌CT-A16对于3个病原菌的抑制效果都非常明显;金黄短杆菌CT-A16的挥发性物质对病原菌菌丝生长也表现出一定的抑制作用。


内生菌对植物病害的生物防治已研究多年并取得了很好的应用效果,何红等也证实了分离自辣椒的内生芽孢杆菌对辣椒炭疽病菌有拮抗活性。用植物内生的枯草芽孢杆菌处理辣椒苗,然后再接种病原菌,能够将发病率降低81.49%~93.34%。内生菌的拮抗效果除了在实验室的抑菌效果测定外,还需要在大生产过程中的实际应用,以进一步验证内生菌的拮抗效果,这将是今后内生细菌的研究热点。


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