3讨论
阴沟肠杆菌广泛存在于自然界中，鲻鱼经感染后会引起脑脊髓炎并出现大量死亡现象，且该菌对淡水鲨鱼具有高致病性，感染后病鱼表现为胸鳍、腹鳍、尾鳍及内脏出血，并且很快死亡。本文中分离的阴沟肠杆菌来自福建某水产养殖场，通过其在不同培养基生长情况可以看出，该菌在高盐与低盐环境下均可生长，故仍具有感染人与动物的风险。其耐药性较强，对包括青霉素在内的16种抗生素均表现出耐药性，可能与养殖场长期使用各种抗生素防治有关。如今，阴沟肠杆菌的耐药性日益严重，迫切需要开发新型抗菌药物以治疗阴沟肠杆菌感染。
噬菌体因其高效的杀菌作用、高特异性和成本低等优点，在新型抗菌药物的应用上展现出极强潜力。因此，我们分离并鉴定了一株可以侵染阴沟肠杆菌的烈性噬菌体，并将其命名为ZX14。该噬菌体在双层琼脂平板上可形成透亮清晰的噬菌斑，其裂解阴沟肠杆菌2025时，潜伏期为20 min，裂解量为45 PFU/cell，在pH 5~12时有较好稳定性，在37~50℃时其活性长时间无明显变化。因此，若将ZX14用于水产养殖环境消毒会有助于减少对其敏感的阴沟肠杆菌数量，降低水产动物感染发生率。宿主谱分析表明ZX14对阴沟肠杆菌复合体其中3种细菌(阴沟肠杆菌、路德维希肠杆菌、神户肠杆菌)均表现出良好的裂解效果，有望应用于阴沟肠杆菌复合体感染的治疗。目前尚未报道有噬菌体可同时裂解该三种细菌，根据宿主谱、最佳MOI及裂解量等特性，可以考虑将潜伏期或宿主谱与噬菌体ZX14互补且裂解量高的噬菌体与ZX14组成一种有效的噬菌体鸡尾酒，用于防控耐药性阴沟肠杆菌。
噬菌体ZX14的测序结果显示，其基因组全长173 679 bp，包含294个ORF，与DNA包装有关的ORF所编码的蛋白质包括末端酶大亚基和小亚基，它们在双链DNA病毒包装过程中扮演重要角色。小亚基决定了DNA包装的特异性，而大亚基与噬菌体结构相关ORF所编码的门户蛋白结合，形成的五聚体为DNA包装提供了动力，使DNA能装入衣壳中。与噬菌体裂解有关的ORF可以编码裂解酶，裂解酶主要作用于噬菌体侵染后期，通过破坏细菌细胞壁，使子代噬菌体得以释放。它是噬菌体繁殖过程中不可或缺的重要蛋白质，帮助噬菌体完成了细胞裂解和噬菌体释放。ZX14基因组中还包含了10个tRNA基因，噬菌体本身携带的tRNA能降低噬菌体对宿主菌tRNA的依赖性，一定程度上能提高噬菌体的裂解能力，从而起到扩大裂解谱范围的作用。通过检索CARD与VFDB数据库后，未检测到抗生素耐药或毒力基因，说明噬菌体在控制阴沟肠杆菌生长中安全性较好，具有辅助或替代抗生素治疗耐药性阴沟肠杆菌的潜力。通过系统进化树可以看出，ZX14与Enterobacter phage vB EclM CIP9、Kosakonia phage 305、Enterobacter phage vB EclM Q7622亲缘关系最近，该4种噬菌体均属于神奈川病毒属，故可将ZX14归属于神奈川病毒属新成员。
在获得基因组序列后，需要通过多种不同序列比对方法来确定其新颖性，NCBI比对结果显示，与ZX14序列相似性最高的噬菌体为Q7622，通过将BLAST查询中发现的覆盖率乘以相似性来获得核苷酸相似性粗略估计，其覆盖率为96%，相似率为96.62%，再通过ANI热图分析将ZX14与10种相似噬菌体进行核酸相似性比较，分析结果均低于现行国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses，ICTV)标准对主要物种划分的95%。根据核苷酸水平分析及系统发育分析所产生的差异，可以认定噬菌体ZX14为一种新型阴沟肠杆菌噬菌体。
4结论
本研究成功分离出一种新型阴沟肠杆菌噬菌体，通过对其生物学特性和稳定性测定与分析，证明其具有高效价、快速增殖及强大稳定性等特点。同时，通过对其基因组进行比较，确保了噬菌体ZX14的新颖性。因此，该噬菌体具有进一步开发成抗致病性阴沟肠杆菌产品的潜力，为未来治疗超级细菌提供了新途径。
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