细胞复苏是指将冻存在液氮或低温冰箱中的细胞解冻后重新培养，使其恢复生长的过程。细胞复苏过程中，需要遵循快速融化的原则，这样可以保证细胞外结晶短时间内融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内再形成冰晶对细胞造成损伤。细胞复苏后1-2天，细胞活性会逐渐得到恢复（如图1为复苏HEK293T细胞数对数值）。
细胞复苏的主要实验过程如下：
步骤1：从液氮容器或低温冰箱中取出冻存管，迅速将其浸入37℃的温水中，并不时摇动以使其尽快融化。37℃水浴时间尽可能短（1-2min），因为延长时间会增加细胞死亡率；
步骤2：当细胞完全融化后，从水浴中取出冻存管，用酒精棉球消毒外部，然后开启瓶盖；
步骤3：将细胞悬液转移到离心管中，加入适量的培养液，并进行离心，以去除DMSO和死细胞；
步骤4：离心后，弃去上清液，用新的培养液重悬细胞，并计数，调整细胞密度；
步骤5：将细胞接种到培养瓶中，37℃静置培养。在培养初期，应注意观察细胞状态，以确保其正常生长。
图1.HEK-293T细胞生长曲线（复苏后）
图2.细胞复苏操作流程图
细胞复苏注意事项
1.注意无菌操作，避免细胞污染，可使用支原体去除喷雾剂提前对实验室环境，培养箱进行处理；
2.融化细胞时，温度和时间应严格控制，以避免对细胞造成损伤；
3.在细胞接种后，应定期观察细胞生长情况，疑似支原体污染时可使用可视化LAMP支原体检测试剂盒检测，若发生支原体污染，可使用支原体去除试剂及时处理。
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